Разное

Крепление осп плит: Обшивка стен OSB плитами. Как правильно крепить ОСБ плиты к стене снаружи дома.

Содержание

Обшивка стен OSB плитами. Как правильно крепить ОСБ плиты к стене снаружи дома.

OSB (ОСБ) или ОСП (ориентированно-стружчатая плита) — современный конструкционный материал, ставший серьезной альтернативой фанере, ДСП и нашедший широкое применение в строительстве каркасных домов и отделке зданий и строений. Плитами OSB обшивают внутренние и наружные стены помещений, полы и крышу. Обшивка стен плитами OSB имеет место в каркасном строительстве, когда плита выступает конструкционным материалом и служит для усиления стен здания, или когда выступает в качестве фасадного материала бетонных, кирпичных или деревянных домов, что вызвано небольшой ценой и высокой прочностью и долговечностью материала. В этой статье мы рассмотрим вопрос: как крепить ОСБ плиты к стене с внешней её стороны.

Для обшивки наружных стен, необходимо использовать плиты с маркой OSB-3, специально изготовленные для среды с повышенной влажностью. О том как различаются виды ОСП листов можно узнать на странице: ОСП листы, их виды, характеристики, размеры.

При монтаже ОСБ плит к наружным стенам, обрешетку используются для следующих целей:

  • выравнивание плоскости стены;
  • создание вентиляционного зазора для утеплителя под ОСБ плитой;
  • предотвращение деформации плиты вызванное подвижками основания, особенно актуально для ОСБ плит толщиной 9 мм и менее.

Крепление ОСБ плит к стене поверх утеплителя с использованием обрешётки

Крепление плиты к стене осуществляется с использованием обрешётки, которую делают из деревянного бруска, или металлического профиля. Технологии монтажа ОСБ плит на стену с деревянной обрешеткой и обрешёткой из металлического профиля принципиально не отличаются. При выборе бруска, желательно выбирать сухой, строганный брусок 40-50 мм, тогда его не вывернет и не поведёт после высыхания, что положительно скажется на ровности всей стены.

Для крепления бруска и профиля к стене используют специальные металлические пластинки (подвесы). Прежде чем крепить подвесы, необходимо начертить на стене вертикальные полосы, расстояние между которыми должно быть вдвое меньше ширины листа, что в последующем, обеспечит стык плит прямо посередине бруска или профиля и даст возможность закрепить плиту OSB по центру по всей её длине. После того как начерчены линии, вдоль них крепят подвесы с шагом 30-40 см.

Металлический подвес используется для крепления обрешётки.По размеченным линиям крепятся подвесы. Подвесы позволяют закрепить обрешётку над утеплителем.

После этого укладывают утеплитель и накрывают его мембраной, защищающей утеплитель от попадания влаги, после чего монтируется обрешётка.

Следует учесть, что снаружи здания пароизоляция не нужна, так как она предотвращает попадание влажного воздуха в утеплитель изнутри помещения, а с внешней стороны строения избыток влаги должен свободно выходить наружу.

Стена с обрешёткой. Между обрешёткой и стеной уложен утеплитель.

После закрепления обрешётки можно приступать к монтажу OSB плит. Для обшивки стен чаще всего используется плита от 9 до 12 мм толщиной. Если поверх плиты не монтируется фасад, то плита должна быть влагостойкой. К обрешётке из деревянного бруса плиты OSB крепятся гвоздями длиной как минимум в 2,5 раза больше толщины листа ОСП. К обрешетке из металлического профиля — на саморезы по металлу длиной на 10-15 мм больше толщины ОСБ листа.

При таком монтаже обрешётка весит над утеплителем, и не создаёт мостиков холода в утеплителе между стеной и плитами ОСП. Благодаря такому решению достигается максимальная эффективность работы утеплителя. Кроме того, между брусьями обрешётки находится воздушный зазор, через который выводится влага из утеплителя, что также повышает его характеристики. Более подробная информация о технологии вентилируемого фасада есть в статье: вентфасады, виды вентилируемых фасадов.

Крепление ОСБ плит к деревянному каркасу

При строительстве каркасных домов рекомендации по выбору листов такие же, как и при обшивке ранее возведенных стен. Отличие лишь когда листы выступают в роли элемента жесткости. В этом случае их толщина должна быть не менее 12 мм. Рекомендуемая толщина обычно 15-18 мм.

При монтаже стен с деревянным каркасом применяют два основных подхода: крепление листов ОСБ к каркасу через обрешётку и крепление листов ОСБ непосредственно к каркасу без обрешетки. Рассмотрим оба.

Как крепить стены к каркасу с использованием обрешётки

Когда с внутренней стороны стены к каркасу крепятся прочные плиты, обеспечивающие хорошую жесткость конструкции стены, тогда снаружи между каркасом и ОСП плитой можно сделать обрешетку. Обрешётка образует воздушные полости для вентиляции утеплителя и снижает деформационные нагрузки от каркаса на ОСП плиту.

Между стойками каркаса укладывается утеплитель. Поверх стоек и утеплителя крепят ветро- и гидроизоялционную мембрану, легко пропускающую влагу. Далее крепится обрешетка и на неё ОСБ плиты.

Монтаж ОСБ плит на деревянный каркас с обрешёткой.

При таком исполнение плиты можно оставить без отделки, можно покрасить их, заштукатурить или закрепить на них практически любой фасадный материал.

При креплении ОСБ плит без  использования обрешётки достигается максимальная жесткость конструкции стены. В этом случае рекомендуется ветро- и гидрозащитную мембрану крепить за ОСБ плитой, далее монтировать обрешетку для создания вентзазора и на неё фасадный материал, например сайдинг, доски или декоративные панели. К деревянному каркасу плиты OSB крепятся на гвозди длиной как минимум 2,5 раза больше толщины листа ОСП.

Преимущество использования гвоздей перед саморезами при креплении ОСП с внешней стороны дома обосновано тем, что гвозди лучше переносят деформации OSB листов под атмосферными воздействиями.

 

Монтаж ОСБ на стены каркасного дома без обрешётки

Среди способов обеспечения каркасу жесткости оптимальными считаются три способа, которые можно комбинировать между собой:

Крепление листовых материалов к стойкам каркаса внутри дома;

Укосины между стойками каркаса;

Крепление листовых материалов к стойкам каркаса снаружи дома.

Когда листы ОСБ монтируются к стойкам каркаса снаружи дома, то обрешётка между листами и стойками каркаса приводит к снижению жесткости почти в два раза. Поэтому для обеспечения максимальной прочности конструкции из неё исключают эту обрешетку. Без обрешетки пропадает вентзазор, поэтому рекомендуется такую обрешетку крепить поверх листов ОСБ. На OCБ крепят гидроветрозащитную паропроницаемую плёнку, далее обрешетку, и сверху любой подходящий фасадный материал: сайдинг, профнастил, дерево, фасадные панели и так далее.

Технология крепления ОСБ листов к деревянному каркасу без использования обрешётки.

Так, например, при строительстве каркасного дома по финской технологии «Платформа» между каркасом и лисами ОСБ нет обрешетки. Более подробно об этой технологии можно узнать в статье: строительство каркасного дома по технологии «Платформа».

Описанный выше вариант предпочтителен. Но есть и другие способы. Когда нужно чтобы закрепленные к стойкам листы ОСБ выполняли роль фасада, и на них сверху ни чего не монтируется, то вентиляционный зазор можно организовать между стойками каркаса. Для это пространство между стойками каркаса заполняется утеплителем не полностью. Оставляют 2-3 см для вентиляционного зазора между утеплителем и листами ОСБ. Гидроветрозащитную паропроницаемую пленку крепят к каркасу с помощью реек. Так чтобы эти рейки оставались между стойками — по двум сторонам к каждой стойке.

Вентиляционный зазор при креплении листов ОСБ непосредственно к стойкам каркаса

Компромиссным вариантом служит использование косой обрешетки. Она укладывается под углом 45 градусов. Это способствует повышению жесткости по сравнению с прямой обрешеткой. Для увеличения жесткости в качестве такой обрешетки лучше подходят доски толщиной 25 мм. Доска крепится к каждой стойке каркаса двумя гвоздями. В связи с повышенным расходом материалов и сложностью работ такой способ применяется крайне редко, поэтому нет статистической информации об эксплуатационных характеристиках построенных домов.

Косая обрешётка.

 

Крепление ОСБ плит к металлическому каркасу

Крепление осуществляется аналогично варианту с деревянным каркасом. При креплении плит непосредственно к металлическому каркасу используют саморезы по металлу длиной на 10-15 мм больше толщины ОСБ листа.

Общие правила монтажа ОСБ плит к стене

Не зависимо от выбранного способа крепления листов ОСБ есть общие правила, соблюдение которых обеспечит максимальную прочность, надёжность и долговечность конструкции обшивки.

  • Саморезы следует вкручивать на расстоянии 10-15 см друг от друга и не меньше 1 см от края плиты.
  • Между нижней плитой и фундаментом необходим зазор 10 мм для предотвращения скоплений воды.
  • Плиты нельзя стыковать вплотную друг другу, между ними необходим зазор 2-3 мм, чтобы плита могла беспрепятственно расширяться от перепадов влажности.
  • Все дверные и оконные проемы вырезаются лобзиком или циркулярной пилой, но если необходимы идеально ровные стыки и пропилы, то можно с готовыми размерами и листами OSB приехать в мебельный цех, где за небольшую плату распилят ваши листы на форматно-раскроечном станке ровно и точно по размерам.

Какой стороной крепить ОСБ листы

Все стороны ОСБ листов не отличаются по составу. Но есть отличия в поверхностях. Часто одна сторона гладкая, а другая шероховатая. В этом случае при монтаже плит на стены с внешней стороны здания листы лучше крепить гладкой стороной наружу. При такой ориентации дождевая вода не будет скапливаться в таких количествах в неровностях плиты. Вода способствует ускорению разрушения плиты. Защита листов от проникновения в них воды способствует увеличению их долговечность.

При монтаже плит на крыше под кровлей, в свою очередь, ОСБ листы рекомендуют располагать шероховатой стороной вверх для того, чтобы по ним было не скользко ходить во время работ по обустройству крыши.

При монтаже ОСБ плит в, защищенных от воздействия влаги, местах выбор их ориентации не оказывает существенного влияния на последующую эксплуатацию.

Защита стены от мышей, птиц и насекомых

В большинстве случаев монтажа OSB листов снаружи дома предусмотрен вентзазор. По нему движется воздух, который поступает снизу стены из окружающего пространства и выходит сверху обратно в атмосферу. Глухая заделка вентзазоров с какой-либо из сторон не допустима. Иначе вместо вензазора получается замкнутая воздушная полость.

В вентиляционный зазор могут проникать, осы, мыши, мелкие птицы и строить там гнёзда, нарушая тем самым характеристики стены. Поэтому рекомендуется предусмотреть защиту, на этапе её строительства или ремонта.

Есть несколько вариантов защиты стены от грызунов, птиц и насекомых, рассмотрим их.

  1. Защита с помощью металлических сеток и листового метала с мелкими отверстиями. Лучше использовать нержавеющий метал, который не будет подвергаться коррозии. Сетку или полоски метала крепят снизу и сверху стены за ОСП листами, чтобы они не влияли на внешний вид дома.
  1. Малярная сетка. Отличается от предыдущего варианта низкой ценой и меньшей прочностью.
  1. Перфорированный фасадный материал в нижней и верхней части стены. Например, в случае сайдинга это перфорированные софиты.

Решетки или сетки монтируют на входе и выходе вентиляционных зазоров.

После монтажа ОСБ листов можно приступать к заделке швов и дальнейшей отделке. О том как правильно заделывать зазоры, какой материал заделки и в каких случаях выбирать можно узнать в отдельной статье: правильная заделка стыков ОСБ.

обшивка стен, крепление, отделка поверхности

Основная сфера применения ОСБ плит – это обустройство конструкционных элементов здания: крыши, пола, стен. При этом монтаж осб плит имеет некоторые особенности, знание которых поможет сделать обшивку качественной и долговечной. До того, как начать монтаж, необходимо определиться с выбором метизов, которые будут играть главную роль при закреплении ОСБ.
Содержание:

Применяемые гвозди и шурупы

Существует множество разновидностей гвоздей, которые используются в зависимости от места крепления плиты и её веса:

  • отделочные: используют там, где желательна маскировка и вероятность выдергивания сведена к минимуму. Часто применяют совместно с клеем.
  • круглые без шляпки: нужны при настилании полов, при монтаже каркасных конструкций и при закреплении плит, имеющих шпунтовое соединение
  • со шляпкой: применяются там, где нет необходимости в маскировке;

Также существуют специальные гвозди, имеющие нарезку кольцевого или винтового типа. Такие метизы лучше удерживают прибитую плиту, но плохо поддаются выдергиванию.

Наиболее подходящие элементы для крепления ОСБ

Лучше всего крепить панели посредством шурупов, предназначенных для работы с деревом – надежность крепления резко возрастает. При этом допускается использование гораздо меньшего числа шурупов, если сравнивать с количеством гвоздей. При необходимости шуруп можно запросто вывернуть, переключив шуруповерт на реверс.

Отделка крыши

До начала монтажа необходимо удостовериться в параллельности обрешетки или стропильных ног. Поверхность должна быть выровненной, а несоблюдение этого требования ведет к невозможности надежного соединения паз-гребень.

Если подготовленные к монтажу плиты попали под дождь, то их перед укладкой необходимо просушить.

До монтажа следует убедиться, что чердачное пространство имеет соответствующую вентиляцию (общая площадь вентиляционных отверстий должна быть не менее 1/150 от всей площади по горизонтали).

Схема правильной укладки ОСБ на крышу

Наибольшая часть эксплуатационной нагрузки должна ложиться на длинную ось плиты. Сочленение коротких торцов должно осуществляться на подпорках крыши. Длинные стороны стыкуются на вспомогательных опорах, способ соединения – паз-гребень или Н-образные скобки.

Если у плит края ровные (т.е. отсутствует шип и паз), то следует оставлять дилятационный зазор в 3 миллиметра. Это даст возможность материалу изменять размеры при перепадах температуры без ущерба для качества покрытия.

Плита должна лежать, как минимум, на 2-х опорах (на них и должно приходиться соединение). Ниже показана зависимость расстояния между элементами обрешетки от толщины ОСБ (для крыш, имеющих наклон не более 14-ти градусов):

  • 1м: толщина плиты от 18-ти мм;
  • 0,8 метра: толщина от 15-ти мм;
  • 0,6 метра: толщина от 12-ти мм.

При укладке плиты рядом с дымоходом необходимо соблюдать установленные СНиПом нормы. Качественное крепление осб плиты к стропилам возможно с использованием кольцевых гвоздей от 4,5 до 7,5 см длиной, либо спиральных длиной в 5,1 см. Расстояние до края плиты не может быть менее 10 мм.

Монтаж ОСБ на стены

Монтаж может идти двумя способами: в горизонтальном положении или вертикальном.

При обходе оконных, дверных проёмов необходимо оставлять зазор примерно в 3 мм.

При расстоянии меж опорами стены в 40-60 см рекомендуется обшивка стен осб плитой толщиной в 1,2 см. Если необходима теплоизоляция, то её следует организовать до крепления плит. В качестве теплоизолирующего материала предпочтение стоит отдать минеральной вате.

Техника монтажа OSB на стену

Для крепления плит применяются двухдюймовые спиральные гвозди (51 мм) либо кольцевые длиной от 4,5 до 7,5 см. Вбивать их необходимо каждые 30 см в промежуточные подпорки. На местах соединения плит гвозди вбиваются через каждые 15 см. С краю гвозди должны забиваться с шагом в 10 см (не ближе 1 см от края).

Также должны быть оставлены дилятационные зазоры:

  • между верхним краем плиты и венцовой балкой: 1 см;
  • между нижним краем плиты и фундаментной стеной: 1см;
  • между плитами, не имеющими паз-гребневого соединения: 0, 3 см.

Укладка на пол

Перед укладкой материала, необходимо сделать гидроизоляцию (если пол делается на первом этаже).

Соединять плиты ОСБ следует на лагах. Если нет пазов и гребней, выдерживайте тот же зазор в 3 миллиметра. Если предусматривается обустройство плавающего пола, то оставьте зазор между стеной и краем плиты в 1,2 см.

Готовый под укладку финишного покрытия пол

Листы ОСБ должны укладываться перпендикулярно по отношению к лагам. Длинные края плит должны соединяться между собой посредством паза и гребня, а при их отсутствии – Н-образными скобками. Желательно, чтобы соединение лежало на вспомогательной опоре. Короткие стороны плиты обязательно должны соединяться на лагах. Ниже показана зависимость толщины плиты от расстояния между лагами:

  • от 1,5 до 1,8 см: расстояние меж лагами не более 40 см;
  • от 1,8 до 2,2 см: не более 50-ти см;
  • от 2,2 см: расстояние – 60 см.

Для крепления используются такие же типы гвоздей, которые требует обшивка стен осб и обустройство крыши. На промежуточных опорах гвозди забиваются с шагом в 30 см, в местах сочленения плит – с шагом в 15 см.

Для повышения жёсткости всего покрытия, придания ему целостного вида, можно плиты приклеить к лагам. Также нелишним будет проклейка соединения паз-гребень.

Использовать необходимо только синтетический клей (составы на водной основе неэффективны из-за присутствия в структуре плиты парафина).

Отделка OSB

После закрепления понадобится отделка стен из ОСБ. Самый распространенный способ – шпатлевка. Этот метод позволяет герметизировать все щели в местах соединений для предотвращения проникновения влаги. Плюс к этому, качественно проведенная работа поможет подготовить плиты к возможной дальнейшей отделке (например, покрытию лаком или окраске).

Для получения эстетически привлекательного вида лучше использовать плиты, специально отшлифованные производителем. В этом случае придётся меньше затрачивать времени и материала на будущую отделку.

Перед проведением работ следует пройтись по плите наждачкой с мелкой насечкой, а затем покрыть поверхность грунтовкой (она должна быть не на водяной основе). Далее необходимо выбрать, чем шпаклевать ОСБ. Лучше, если выбранный вами состав будет бесцветным. Для этого используйте один из видов шпатлевки:

  • на гипсовой основе;
  • акриловую;
  • латексную.

После завершения этого этапа можно подумать чем отделать стены из ОСБ. Например, это может быть, лакировка. Плиту следует покрывать лаком в 3-4 приёма с полной просушкой каждого слоя. Покрытие лаком придаст блеск поверхности и обеспечит надежную защиту от проникновения влаги.

Внутри помещения рекомендуется использование матовых составов, так как чрезмерный блеск быстро утомляет зрение. Снаружи можно применять и глянцевый лак.

Другой способ отделки – покраска. Используйте краску, не содержащую в своём составе воды. После грунтования и нанесения шпатлевки на плиту ОСБ, ее можно даже ламинировать или отделать специальной пленкой.

Большинство способов отделки дома доступны после того, как была произведена обшивка стен OSB плитой с соблюдением технологий и рекомендаций компании-изготовителя.

на стены каркасного и не каркасного дома

Ориентированно-стружечные плиты можно использовать для отделки стен внутри и снаружи дома. Наружная обшивка из ОСП выравнивает фасад, сохраняет домашнее тепло и порой служит финишным вариантом покрытия. Расскажем, как прикрепить плиту OSB к стене каркасного, блочного, кирпичного или деревянного дома.

Если дом не каркасный

Порядок монтажа ОСБ плит на стены с сооружением обрешетки:

  1. Начертите вертикальные линии на расстоянии, равном половине ширины листа. Если вы будете обшивать стены OSB плитами 1220х2240 мм, то промежуток между линиями должен составлять 610 мм, если листами 1250х2500 мм, то 625 мм.
  2. По чертежу установите металлические подвесы для крепления брусков. Рекомендуемое расстояние между ними составляет 30-40 см.
  3. Уложите утеплитель и покройте его паропроницаемой мембраной.
  4. Установите бруски, которые послужат обрешеткой.
  5. Прикрепите ОСП с помощью саморезов, длина которых должна в 2,5 раза превышать толщину листов.

При нашивке листов на фасад нужно учесть изменение погодных условий в течение года. Между плитами следует соблюдать зазор в 3 мм, чтобы у них оставалось место для расширения в условиях повышенной влажности и температуры. А чтобы под ними не скапливалась вода, между ними и фундаментом нужно оставлять зазор в 1 см.

Внимание! Для наружной обшивки стен используйте только влагостойкие OSB-3 плиты Торжок, которые можно недорого купить у нас по низкой цене с доставкой по Москве и области.

Как обшить плитами стены каркасного дома

Возможно два варианта крепления OSB плит к стенам каркасного типа: к обрешетке и к каркасу без обрешетки. Первый вариант хорош, если внутренние стены выполнены из прочных ОСП плит Кроношпан толщиной 18 мм или более. Благодаря обрешетке образуются воздушные полости для проветривания теплоизоляционного слоя, и уменьшается деформация обшивки под нагрузкой каркаса. Второй вариант подходит, если плиты послужат основанием под другой материал.

Чтобы обшить каркасный дом ОСП с обрешеткой, прикрепите к каркасу бруски из дерева: к каждой стойке каркаса по одному. Между каркасом и обрешеткой проложите слой ветрозащитной мембраны, которая предотвратит разрушение утеплителя под действием ветра. Затем прикрепите плиты к брускам с помощью саморезов. Если вы решили обшивать фасад без обрешетки, крепите листы непосредственно к каркасу. Делать это следует гвоздями: они лучше переносят нагрузку, возникающую в результате деформации обшивки под действием атмосферных явлений.

Особенности монтажа ОСБ плит — DAKO-GROUP

Для создания идеально ровной поверхности ОСБ плита самый подходящий материал. Технические характеристики позволяют этому стройматериалу выдерживать высокие прочностные нагрузки, быть устойчивым к температурным перепадам и влиянию влаги.

Чтобы ОСБ плиты служили долго, необходимо уметь правильно монтировать их. У нас есть для вас инструкция монтажа ОСБ, в которой мы подробно расскажем, как обшивать стены и крышу с помощью плит ОСБ.

Чем крепить ОСБ плиты

Прежде чем приступать к монтажу плит, необходимо знать, с помощью каких материалов их крепить на крышу или на стену. Важно учитывать тот факт, что осб плиты являются древесным стройматериалом. А это значит, что крепежи для ОСБ такие же, как и для древесины.

Для кровли используются саморезы с учетом толщины листа. При этом в каркас крепеж должен входить не меньше, чем на 4 см. Длина крепежа может варьироваться от 5 до 7.5 см в зависимости от толщины плит ОСБ. 

Важно: не использовать гвозди с гладкой поверхностью!

Особенности конструкции плит позволяют прочно закрепить их только с помощью кольцевых или спиральных гвоздей. Такие гвозди используются для монтажа массивной древесины. Используйте крепежи из нержавеющей стали или оцинкованные.

И гвозди, и шурупы по длине должны превышать толщину плит минимум в 2,5 раза. Для дополнительной фиксации используются синтетический монтажный клей для ОСБ. Клей на водной основе не подходит для плит, так как в них содержится парафин.

Для обшивки стен, особенно важно сохранить эстетику. Для это используются саморезы тарельчатой головкой. Они уходят глубоко в полотно, и не портят внешний вид стены. Средний расход крепежей 30-40 штук на квадратный метр. Это значит, что на средний лист ОСБ понадобится 75-100 саморезов.

Монтаж ОСБ для внутренней отделки

В первую очередь, необходимо позаботиться об утеплении стен изнутри. Обеспечьте хорошую вентиляцию, чтобы исключить скопление влаги и промерзание стен. Наиболее подходящим видом плит как для внутренней, так и для внешней отделки являются влагостойкие ОСБ плиты, а именно, ОСБ 3.

Самая оптимальная толщина плит для внутренней отделки 10 мм. Они обеспечивают высокую прочность конструкции.  Технология монтажа зависит от каркаса, на который монтируются плиты.

Монтаж ОСБ с использованием обрешетки

Обрешетка может быть представлена металлическим профилем или деревянными брусьями. Правильно использовать максимально высушенные строганные брусья, толщиной 4-5 см. Обязательно сделайте вертикальную разметку во избежание неправильного крепления. Расстояние между подвесами (специальная металлическая пластина) должно быть не меньше 30 см

Важно: Если вы крепите плиты на деревянную обрешетку, используйте плиты толщиной в 10-12 мм. Для монтажа на металлопрофиля больше подходят плиты с толщиной в 10-15 мм.

Первую плиту всегда монтируйте в углу стены, оставляя зазор в 7-10 мм. По этой плите вы будете ориентироваться в дальнейшем. Далее монтируется лист выше предыдущего с отступом в 2-3 мм. Зазор с таким расстоянием применяется ко всем плитам. Крепежи располагаются каждые 10-15 мм

Если вы монтируете на металлическую обрешетку, можно использовать саморезы по металлу. Это обеспечит дополнительную прочность. Монтаж осб на стену занимает второе место по популярности после гипсокартона. Но прочностные характеристики ОСБ плит позволяют предать общей конструкции большую прочность чем гипсокартон.

Монтаж ОСБ на основание

Основанием может быть бетон или дерево. Для максимального утепления и прочности настила, используются ОСБ 3 толщиной от 22 мм

Поверхность с бетонным покрытием не требует дополнительного выравнивания. Чтобы плиты не деформировались, оставляйте между ними зазор не менее 3 мм. А при монтаже плит возле стен оставляйте расстояние в 12 мм. Клей для крепления должен быть на основе каучука. Дюбели вкручиваются с шагом в 25 см.

Деревянное основание требует использовать гвозди, а не саморезы. Принцип монтажа такой, как и для бетона. Обшивка стен осб плитами внутри помещения не требует особой дополнительной обработки. Если вы предпочитаете интерьер с элементами единения с природой, уникальный рисунок каждого отдельного листа создаст уникальный антураж. 

Монтаж ОСБ для внешней отделки

Облицовка стен осуществляется с помощью ОСБ листов с толщиной от 9 до 15 мм. Чем толще лист, тем большую жесткость конструкции он придает. Всегда обеспечивайте вентиляционный зазор между плитой и поверхностью крепления.

При монтаже ОСБ снаружи каркасного дома, следует соблюдать следующие правила:

  1. Листы ОСБ монтируются горизонтально. ОСБ 3 от Kronospan имеют глянцевое покрытие с двух сторон. Поэтому не имеет значение, какой стороной вы будете размещать плиты. Листы ОСБ должны захватывать минимум на 3 стойки каркаса, это придает конструкции большую жесткость.
  2. Для крепежа используйте ершенные (кольцевые) или винтовые гвозди. Какие именно нужны гвозди для крепления листов ОСБ мы описали выше.
  3. Оставляйте вентиляционный зазор между плитой и гидроизоляционной пленкой.
  4. Шаг крепления по краям должен быть через каждые 10-15 см, в середине – через каждые 20-30 см. Чтобы материал не треснул, отступайте от края на 1-2 см.
  5. Между плитами всегда оставляйте зазор в 3-4 мм. Из-за перепадов температуры и влажности размеры плит могут меняться.
  6. Стык листов ОСБ одного ряда должен быть на середине панели другого ряда. Так обеспечивается дополнительная прочность.
  7. Если этажность дома выше одного, устанавливайте плиты таким образом, чтобы они соединяли этажи.
  8. Дополнительная обработка плит снаружи может осуществляться с помощью лакокрасочных материалов, пропиток и сайдинга.

Отделка крыши ОСБ плитами

Для обеспечения прочности и влагостойкости, крыши монтируются из плит ОСБ 3 толщиной не менее 18 мм.   Отделка крыши ОСБ плитами может осуществляться как на дополнительную обрешетку, так и на стропила. Крепление на стропила подходит для домов чердачного типа без дополнительного утепления.

Те строители, которые предлагают монтаж ОСБ на стропила с использованием дополнительного утепления без учета вентиляционных зазоров, рискуют испортить конструкцию. Так как скапливание влаги приведет к разрушению материалов.

Инструкция монтажа ОСБ на стропила:

  • Перед началом работ балки и листы обрабатывайте антисептиком, чтобы защитить от насекомых, грибка и плесени. 
  • Монтаж осуществляйте только в сухую погоду. Наготове должен быть тент во избежание попадания влаги во время осадков, если кровельные работы еще не окончены.
  • Безопасность прежде всего! Установите временные полки для перемещения, и закрепите страховочные тросы.
  • Размер ершовых гвоздей должен быть от 70 до 100 мм.
  • Обшивайте нижние края скатов с помощью прогонов. Это позволяет получить идеально ровный стартовый уступ. Плиты не будут соскальзывать.
  • С помощью маркировочной (отбойной) нити делятся разметка. 
  • Листы ОСБ укладываются поперек опор. Начинайте кладку плит с середины ряда. Крайние листы в ряду должны быть обрезаны наполовину. Эти половины используются для укладки следующего ряда. Так вы сместите стыки в каждом ряду, и получите более жесткую конструкцию. Всегда оставляйте зазор меду плитам в 3 мм.
  • На стыках крепеж осуществляется с шагом в 15 см. Для опорных стропил шаг 30 см, а край крыши требует шаг в 10 см.
  • Устанавливайте дополнительные фиксаторы между рядами плит, это обеспечить дополнительную прочность.
  • Верхний конек обшивается в последнюю очередь. Для этого используйте остатки ОСБ.

Важно: Шаг между стропилами должен быть кратен размерам листов ОСБ. Балки должны быть не тоньше 5 см, для прочности конструкции.

Монтирование ОСБ плит на обрешетку осуществляется по такому же принципу. Разницей является создание внутренних слоев. С нижней стороны стропил крепится диффузионная гидроизоляция. Пленка крепится горизонтально с помощью акрилового скотча. Учитывайте нахлест в 10-15 см. 

Утеплитель укладывается между несущими балками. Дополнительная пароизоляция под утеплителем обеспечивает крепкую фиксацию, и не дает материалу проседать. На стропила укладывается слой трехслойной диффузной мембраны, и обязательно шероховатой стороной наружу. Это обеспечит защиту от влаги. Мембрана должна выступать за край утеплителя на 15-20 см.

Обязательно клеится уплотнительная лента над каждым стропилом на мембрану.  После этого крепится дополнительная обрешетка из брусков 50х50 мм на стропила, строго на полосы уплотнительной ленты. Бруски крепятся в шахматном порядке. Плиты ОСБ крепятся саморезами на обрешетку.

Помимо соблюдения технологии монтажа, используйте влагостойкие осб плиты, которые избавят вас от дополнительных расходов на влагозащиту. А наша компания позаботиться о том, чтобы вы получили нужные ОСБ плиты в нужное время.

Легкой вам стройки!

Способы монтажа плит ОСБ

Известно, что существует множество вариантов использования плит ОСБ. Продажа данного материала осуществляется уже в готовом к применению виде, однако для осуществления определенных работ может потребоваться его дополнительная обработка.

Так, монтаж листа фанеры может предполагать использование винтов или гвоздей, болтов, скоб, заклепок и клея. При этом в случае с плитами ОСБ допустимо применение любого способа крепления. В то же время, определяя то, каким именно образом будет осуществляться монтаж, необходимо учитывать будущие условия эксплуатации, а также требования к прочности и внешнему виду конструкции.

Использование гвоздей в качестве способа крепления обычно применяется в случае, если панели предназначены для создания стен либо потолка. При этом шляпка гвоздя после осуществления монтажных работ должна оказаться скрытой либо вдавленной. Оптимальными вариантами считаются либо обычные проволочные гвозди, либо кислотоупорные гвозди, на которых не образуется ржавчина. К слову, последние чаще применяются для крепления внешних облицовочных панелей.

Длина гвоздей при монтаже должна в 2.5-3 раза превышать толщину панели. Если панели используются под стены и потолок, то гвозди забиваются с интервалом в 10-20 см вдоль краев и 20-30 см в середине. Если с помощью плиты ОСБ обустраивается напольное покрытие, интервал может быть увеличен на 10 см в среднем. При этом крайние ряды гвоздей могут располагаться в непосредственной близости от края панели (отступ может составлять около 1,2-1,5 см).

Винтовые соединения также нередко используются при монтаже плит ОСБ. Продажа данного материала оказывается востребованной в самых разных сферах, а сам он имеет множество применений, в ряде которых именно винтовые соединения являются необходимым условием использования листов фанеры. Так, в отделочных работах, при изготовлении корпусной мебели либо выставочных стендов, а также в кораблестроении монтаж плит ОСБ производится именно с помощью винтов, которые обеспечивают надежное соединение листов между собой.

Для того, чтобы выполнить крепление листа, в плите предварительно высверливаются вспомогательные отверстия, размеры которых соответствуют диаметру винта. Соединение должно выполняться таким образом, чтобы шляпка винта не проникала в лицевой шпон. Использование шайб является вполне допустимым, а в ряде случаев и необходимым. В результате крепления лицевая сторона фанерного листа ни в коем случае не должна быть повреждена.

Наконец, еще один способ крепления листа фанеры — это склеивание. Для плит ОСБ подходит практически любой древесный клей, причем выбор конкретного наименования должен определяться в зависимости от целого ряда параметров. В их числе требуемая прочность соединения, способ работы, то, насколько высокой будет влажность при использовании готовой конструкции. Если склеивание фанеры осуществляется в процессе производства внутренних (например, отделочных) работ, то сам клей должен быть безопасным для здоровья, не содержать вредных и агрессивных веществ.

В случае, если предполагается, что готовая конструкция будет находиться под воздействием неблагоприятных факторов окружающей среды, можно использовать эпоксидный клей либо фенол, которые обеспечивают повышенную прочность соединения. Эпоксидные клеи также применяются в тех случаях, когда необходимо приклеить плиту ОСБ к металлической поверхности. В любом случае клей должен наноситься ровным слоем на обе склеиваемые поверхности, излишки вещества необходимо убирать до того момента, как оно застынет, а сами поверхности плотно прижимать друг к другу, для чего в том числе могут использоваться специальные зажимы, а также винты либо гвозди.

Как делать монтаж ОСБ плитами

OSB плиты — особенности монтажа для внешних и внутренних работ

Уникальные по физико-механическим свойствам и бюджетные ориентированно-стружечные плиты или OSB представляют собой популярный современный материал. Она состоит из многослойных листов из древесных щепок, склеенных под прессованием при высоком давлении и температуре с помощью различных водостойких смол, борной кислоты и синтетического воска.

Ориентированной плита называется за счет того, что разные ее слои имеют либо продольную, либо поперечную ориентацию. ОСБ является первым материалом, имеющим древесное происхождение и разработанным под строительные цели.

Классификация и область применения OSB плит

Сейчас выделяют 7 основных видов данного строительного материала:

  • OSB-1 — целесообразно использовать при условии пониженной влажности, то есть в качестве обшивки и упаковки, а также в мебельной отрасли.
  • OSB-2 — применяются в сухих помещениях для формирования несущих конструкций.
  • OSB-3 — для создания несущих конструкций в условиях повышенной влажности.
  • OSB-4 — для изготовления конструкций, подвергающихся высокой механической нагрузке при большом уровне влажности.
  • Лакированная — покрытие лаком осуществляется с одной стороны. Широко используется в мебельной индустрии.
  • Ламинированная — покрывается ламинатом и идет под многоразовую опалубку для бетонных работ с количеством циклов до 10.
  • Шпунтованная — имеет обработанные торцы паз-гребень с 2 или 4 боков, применяется в качестве укладки по площади поверхности.

Какие инструменты необходимы для работы с ОСБ

Независимо от сферы применения, ориентированно-стружечные плиты всегда фиксируются к металлическому или деревянному каркасу с использованием саморезов. В качестве альтернативы могут использоваться дюбели или гвозди. Гвоздей можно взять несколько видов в зависимости от того, где будет крепиться OSB и какой ее вес – отделочные, без шляпки круглые и со шляпкой.

Обрабатывать материал достаточно легко и резать ее можно даже с помощью обыкновенной ножовки, но, чтобы ускорить и упростить процесс, лучше подойдет электрический лобзик с пилкой для дерева и крупными зубьями. Дополнительно для работы могут потребоваться следующие инструменты, материалы и приспособления:

  • брусья деревянные 4 на 4 см;
  • шуруповерт;
  • минеральная вата или другую подходящую теплоизоляцию;
  • саморезы;
  • антисептик от гниения;
  • шпатлевка;
  • кисть;
  • краска или лак для отделочных работ;
  • электролобзик.

Для создания напольных покрытий, монтаж будет реализовываться на заранее установленные лаги. При изготовлении кровли для выполнения опорной функции под плиты потребуется деревянная обрешетка. При обшивке стен крепление идет преимущественно на металлические каркасы, собираемые из специальных профилей.

Монтаж OSB снаружи дома

Перед началом отделки крыши, нужно убедиться в параллельности стропильных ног или обрешетки. Поверхность необходимо выровнять, а плиты должны быть хорошо просушены. До начала работ с крышей следует проверить, имеет ли чердачное пространство нужный уровень вентиляции – вентиляционных отверстий должно быть не меньше, чем 1/150 от полной площади (имеется в виду по горизонтали).

Для облицовки стен оптимально подходит OSB с толщиной от 9 до 15 мм. Для видов с толщиной от 12 мм расстояние между опорами стен должно оставаться в пределах 400-600 мм. Особенности технологии монтажа выглядят следующим образом:

  • Монтироваться листы могут как вертикально, так и горизонтально.
  • Нужно оставить зазор не менее 3 мм вокруг оконных и дверных проемов.
  • Для двухэтажного дома крепление к оконному проему лучше реализовывать с помощью цельного листа, чтобы прорезать окно.
  • Для теплоизоляции стен рекомендуется дополнительно применять минвату из минеральной штукатурки.
  • Под стеновой OSB берутся гвозди спирального типа на 51 мм или кольцевого на 45-75 мм, вбиваются на каждые 30 см промежуточных подпор и на 15 см на соединения, на наружных краях – через каждые 10 см.

При двухэтажном здании расположение листа должно быть таким, чтобы он заходил на стойки всех этажей, при этом верхняя обвязка должна быть перекрыта приблизительно серединой листа.

OSB для внутренней отделки

Перед тем как приступить к обшивке каркасного дома изнутри, нужно утеплить стены и закрыть каркас снаружи (мембраной). Обшивка внутри производится таким образом:

  1. Листы кладут поочередно друг за другом, прикручивая к каркасу дома, оставляя зазор примерно 3 мм;
  2. Крепление осуществляют саморезами для дерева с длиной от 25 до 40 мм;
  3. Вырезку монтажных отверстий для дверей и окон осуществляют лобзиком;
  4. Под обрешетку лучше брать металлический профиль.

В финале стены можно затонировать или покрыть лаком по своему усмотрению.

Еще про фанеру и OSB

Все статьи

Обшивка стен осб плитой — особенности и способы крепления

Главная / Дизайн потолка / Дизайнерские решения / Особенности обшивки стен осб плитой

Современная строительная индустрия предлагает огромное количество самых разных материалов для строительства и отделочных работ. Одним из них является OSB, или по другому ориентировано стружечная плита — материал, который с успехом может заменить привычную фанеру или ДСП при отделочных работах как внутри, так и снаружи помещении. При этом, отделка стен осб плитами легко выполняется своими руками, так как ничего сложного в этом процессе нет.

Выбор плит

Еще до того как обшить стены осб панелями, их нужно правильно выбрать. Имеет значение два фактора: способность материала переносить воздействие воды или влажной атмосферы – для наружной отделки, а также класс эмиссии формальдегида. Последний момент важен в любом случае. По степени влагостойкости эти плиты можно разделить на несколько групп:

  • OSB 1 – наименее влагостойкая разновидность. Используется при изготовлении мебели. Для отделки не подойдет.
  • OSB 2 – более прочный, чем первый вариант, но, также с плохой влагостойкостью. В некоторых случаях такими деталями можно обшивать сухие помещения.
  • OSB 3 – наилучший вариант. Детали обладают хорошей водостойкостью и прочностью. Могут использоваться для внутренней отделки любых помещений.
  • OSB 4 – материалы, применяемые для наружной отделки, обладающие максимальной стойкостью к воде и прочностью.

Остается выяснить, отделка стен каким именно типом осб будет лучшим вариантом. Помимо стойкости к воздействию воды есть еще один параметр – эмиссия формальдегида. Проще говоря, объем вредного для здоровья вещества, содержащегося в материале и попадающего в воздух, которым вы будете дышать. Чтобы исключить споры о вредности или безопасности этого материала, сразу можно сказать: в склеивающих стружки смолах формальдегид содержится!

Однако это вовсе не означает, что применять такую отделку внутри дома нельзя. Важно обратить внимание на маркировку панелей – если они отмечены, как имеющие класс эмиссии «Е1», то обшивка стен внутри дома такой плитой не нанесет никакого вреда вашему здоровью. Они проходят соответствующий контроль и уровень выделения вредного вещества ничтожно мал – не выше, чем у собранной из ДСП мебели, которая также склеена смолами, содержащими формальдегид.

Способ крепления

Выбрав наиболее подходящий тип деталей можно переходить к остальным нюансам работ. Прежде всего, нужно выяснить, как крепить осп к стене. Есть несколько способов и можно выбрать тот, который вам больше подходит:

  • Вариант первый и наиболее популярный — на обрешетку. Ее можно собрать из металлических деталей или деревянных брусков. Рассматривать все тонкости этих работ нет нужды – разобраться, как сделать обрешетку под осб на стены, сможет даже ребенок.
  • Фиксация на несущем каркасе постройки при отделке частного дома. Здесь также не возникает никаких сложностей – обшить стены внутри дома осб лучше еще на этапе строительства и детали просто крепятся саморезами к каркасу.
  • Фиксация панелей на бетонные стены осуществляется посредством обрешетки или прямо на бетонное основание. Последний вариант возможен, если стены достаточно ровные.

В остальном, монтаж осб на стены происходит точно также, как и обшивка уже всем привычным гипсокартоном. Отличие будет состоять лишь в размерах деталей – стружечные панели нередко имеют такой размер, который позволяет перекрывать все пространство между полом и потолком одной деталью. Поэтому, не приходится крепить панели «в разбежку». При поперечном монтаже принцип смещения элементов использовать необходимо.

Монтаж элементов на деревянный или металлический каркас осуществляется на спиральные гвозди или саморезы соответствующего размера. Если же производится крепление к бетонной стене без каркаса или обрешётки, то необходимо использовать качественные дюбеля. Помимо этого, есть несколько моментов, о которых нужно будет помнить:

  • От края детали при фиксации следует отступить не меньше, чем на один сантиметр.
  • Расстояние между точками фиксации составляет на промежуточных участках около 30 сантиметров, а в местах стыков плит – около 10.
  • Соседние листы крепятся с зазором в 3-5 миллиметров для того, чтобы плиты не покоробились. После того, как монтаж осб плиты на стену будет закончен, все зазоры заполняются акриловым герметиком.

Если внимательно изучить технологию, то крепление осб к стене происходит очень быстро и не вызывает никаких затруднений. Нужно лишь помнить о том, что вес деталей может оказаться приличным и при необходимости позвать помощника.

The Fix — Лекарство Эдварда Дженнера от оспы — Смитсоновские библиотеки / Unbound

Когда книга, имевшая влияние на книгу Эдварда Дженнера «Исследование причин и следствий Variolae Vaccinae », попадает в лабораторию по консервации, мы очень воодушевляемся. Это первое издание 1798 года, часть библиотеки Дибнера, описывает методику заражения пациентов легким вирусом коровьей оспы для создания иммунитета от очень заразного и часто смертельного вируса оспы. В результате его открытий Дженнер считается отцом иммунологии, и ему приписывают спасение большего числа жизней, чем любому человеку в истории.

Переплет представляет собой оригинальный бумажный переплет 18 века с бумажной обложкой под мрамор. На текстовый блок в какой-то момент попала вода, и он сильно поврежден плесенью. Ситуацию усложняют нанесенные вручную кровавые отпечатки с пустулами коровьей оспы. Чернила на пластинах нестабильны, поэтому их нельзя мыть.

Помимо формы и тонких пластин, вышивание ухудшилось, и части текстового блока были отделены от переплета.Чтобы вставить листы и закрепить листы книги, было нанесено большое количество животного клея. Во многих случаях клей просачивался между стеблями, создавая неприглядные желтые пятна.

Первым делом нужно было устранить плесень путем замораживания и химчистки книги. После этого текстовый блок был разобран, а текстовые страницы промыты в деионизированной воде. Цветные пластины увлажняли на бане с деионизированной водой, а затем сушили на отсасывающем столе для их выравнивания.

Ремонт бумаги был произведен на участках утраты, вызванной повреждением плесенью, с использованием японской бумаги и клея из пшеничного крахмала. Каждая секция была защищена японской бумагой. Затем секции были заново сшиты, и текстовый блок был снова помещен в исходный футляр.

Этот том теперь готов к повторному включению в коллекцию Hearalds of Science для использования исследователями.

Как дети получили вакцину от оспы во всем мире

30 ноября 1803 года судно Maria Píta вышло из испанского порта и взяло курс на запад в сторону Америки.На корабле находилась небольшая группа людей, перед которой стояла историческая миссия: совершить кругосветное путешествие, распространяя вакцину от оспы. В Королевской благотворительной экспедиции вакцины, как ее называли, работали несколько врачей, два хирурга и четыре медсестры. Сама вакцина была введена под кожу двадцати двух мальчиков-сирот в возрасте от трех до девяти лет.

До изобретения вакцины эпидемия оспы опустошала Европу, вызывая смерть почти в одной трети случаев.В обширных заморских колониях Испании чума была еще хуже. «Последствия последовавших друг за другом эпидемий были разрушительными», — пишут иммунолог Катрин Марк и эпидемиолог Хосе Г. Ригау-Перес. Уровень смертности в Америке может достигать 50 процентов. Колониальные губернаторы умоляли о некоторой помощи.

«Успешное кругосветное путешествие с вакциной… зависело от одного носителя — маленьких мальчиков».

Эдвард Дженнер разработал вакцину от оспы в 1799 году.Он заметил, что доярки, вылечившиеся от коровьей оспы, гораздо более легкой болезни, по-видимому, также выработали иммунитет к оспе. Рисуя лимфу из пустул коровьей оспы на коже человека, Дженнер создал гуманизированную вакцину против коровьей оспы. (Слово «вакцина» произошло от латинского « vacca », что означает «корова»).

Вооружившись этим изобретением, испанское правительство столкнулось с другой проблемой: как его распространять. Они изо всех сил пытались перевезти хрупкую вакцину через океан. «На многих территориях были предприняты попытки получить вакцину лимфу, высушенную на шелковых нитях или запечатанную между стеклянными пластинами, — говорят Марк и Ригау-Перес, — но такие методы сохранения оказались ненадежными в поездках и в теплом климате.”

Итак, «в эпоху до охлаждения, сублимированных вакцин и реактивных самолетов, — пишет историк медицины Джон Бауэрс, — успешное кругосветное плавание с вакциной… зависело от одного носителя — маленьких мальчиков. ” Во время длительного скрещивания около двадцати двух сирот, которые ранее не заразились оспой или коровьей оспой, были «вакцинированы парами каждые девятый или десятый день» путем вакцинации руки к руке (взятие лимфы из неразрушенной пустулы у недавно вакцинированного мальчика и вводя его под кожу другого).Это создало цепочку вакцин — вакцина оставалась активной и жизнеспособной на протяжении всего пути.

Несмотря на тесные условия на корабле и пристальный надзор за мальчиками, с ними «несомненно» обращались хорошо, утверждают Марк и Ригау-Перес. «В конце концов, цепочка вакцинации зависела от их здоровья, а их внешний вид должен был произвести благоприятное впечатление на родителей потенциальных вакцинированных». Король Испании Карл IV даже пообещал особую защиту и образование в школе в Мексике для мальчиков, участвовавших в экспедиции.Тем не менее было также ясно, что «государственные чиновники без колебаний использовали опеку государства в качестве инструмента для улучшения здоровья населения».

После прибытия экспедиция подобрала еще больше мальчиков, не имеющих иммунитета, чтобы использовать их в качестве новых носителей вакцины в своей цепочке (включая «двадцать шесть мексиканских мальчиков… [чьи] родители доверили своих сыновей экспедиции за денежную компенсацию и обещание, что они сделают это»). быть возвращенным »). Всего в десятилетней кампании приняли участие 62 ребенка.Четыре мальчика погибли во время плавания.

Экспедиция путешествовала из Испании в Карибский бассейн, в Мексику, через Южную Америку, на Филиппины и даже в Китай. По оценкам, экспедиция вакцинировала более 100 000 человек. Это было «колоссальным достижением для того времени», — пишут Марк и Ригау-Перес. Спустя более чем сто лет Всемирная организация здравоохранения приступит к аналогичной кампании вакцинации, чтобы положить конец оспе, не считая сирот, глобальными усилиями, которые в конечном итоге приведут к полному искоренению смертельной болезни.


Ежедневно поддерживайте JSTOR! Присоединяйтесь к нашей новой программе членства на Patreon сегодня.

ресурсов

JSTOR — это электронная библиотека для ученых, исследователей и студентов. Читатели JSTOR Daily могут бесплатно получить доступ к оригинальным исследованиям наших статей на JSTOR.

Авторы: ЕКАТЕРИНА МАРК и ХОЗЕ Г. РИГАУ-ПЕРЕС

Бюллетень истории медицины, Vol.83, No. 1, Special Issue: Reassessing Specialpoke Vaccination, 1789–1900 (весна 2009 г.), стр. 63-94

Издательство Университета Джонса Хопкинса

Автор: Джон З. Бауэрс,

Бюллетень истории медицины, Vol. 55, No. 1 (ВЕСНА 1981), стр. 17-33

Издательство Университета Джонса Хопкинса

Иконография и восковые модели в итальянской ранней вакцинации против оспы

  • Aldini, N.Н., Л. Понтони, П. Скарани и А. Руджери. 2007. Documenti e imagini sull’innesto del vaiolo Vacino in Bologna al Principio del XIX secolo. Medicina nei Secoli 19 (1): 195–208.

    Google Scholar

  • Аноним. 1800. Сравнительное изложение фактов и наблюдений относительно коровьей оспы, опубликованное докторами Дженнером и Вудвиллом . Лондон: Закон Сэмпсона.

    Google Scholar

  • Беллони, Л.1962. La medicina a Milano dal Settecento al 1915. In AAVV (1953 1966), Миланская история, Фонд Treccani degli Alfieri per la Storia di Milano , Милан, vol. XVI, 933–1029.

  • Bertolaso, B. 1961. Francesco Luigi Fanzago (1764–1836) patologo e medico-legale nell’Ateneo padovano. Rivista di storia della medicina 2: 225–243.

    Google Scholar

  • Biagini, L. 1808. Rapporto storico-medico delle inoculazioni Ienneriane eseguite в Пистойе . Фиренце: Stamperia Reale.

    Google Scholar

  • Cosmacini, G. 1982 (a c. Di). Scienza medica e giacobinismo в Италии. L’impresa politico culturale di Giovanni Rasori (1796, , 1799), . Милан: Франко Анджели.

  • Fanzago, F.L. 1801. Memoria storica e ragionata sopra l’innesto del vajuolo Vacino , Падуя.

  • Феррарио, г. 1858a. Vita ed opere del grande vacinatore italiano dottore Luigi Sacco e sunto storico dello innesto del vajuolo umano del Vacino e della rivaccinazione . Милан: Libreria di Francesco Sanvito.

    Google Scholar

  • Феррарио, г. 1858b. Della vita e delle opere del Cavaliere Dottore Луиджи Сакко. В AAVV, Monumento al Cavaliere Dottore Luigi Sacco eretto nello Spedale Maggiore , 21–34.Милан: Типография Кьеза.

    Google Scholar

  • Freschi, F. (1851), Storia della medicina in agiunta e continazione a quella di Curzio Sprengel , Milano: Perelli e Mariani.

    Google Scholar

  • Jenner, E. 1798. Исследование причин и последствий вакцины против натуральной оспы: болезнь, обнаруженная в некоторых западных странах Англии, в частности в Глостершире, известная под названием коровья оспа .Лондон: Сэмпсон Лоу.

    Google Scholar

  • Jenner, E. 1799. Дальнейшие наблюдения за вирусом натуральной оспы или коровьей оспы . Лондон: Закон Сэмпсона.

    Google Scholar

  • Дженнер, E. 1800a. Исследование причин и последствий вакцины против натуральной оспы: заболевание, обнаруженное в некоторых западных странах Англии, особенно в Глостершире, и известное под названием коровья оспа. , 2-е изд.Лондон: Закон Сэмпсона.

    Google Scholar

  • Дженнер, E. 1800b. Продолжение фактов и наблюдений, касающихся вируса натуральной оспы или коровьей оспы . Лондон: Закон Сэмпсона.

    Google Scholar

  • Киртланд, Г. 1802 г. 30 Натуральные пластинки оспы и коровьей оспы . Лондон: Дж. Джонсон.

    Google Scholar

  • Маквейл, Дж.C. 1896. Коровья и натуральная оспа: Дженнер, Вудвилл и Пирсон. Британский медицинский журнал 1: 1271–1276.

    Артикул

    Google Scholar

  • Moscati, P. 1785. Приложение sui Principali artifizj anatomici per preparare, e conservare le parti animali. In: Leske, G. 1785. Elementi di storia naturale di NG Leske Professore di storia naturale a Lipsia e members Molte società Scientifiche, ed Economiche tradotti dal tedesco, aumentati, e migliorati da Ermenegildo Pini , 2 vols di, Imperial Monistero С.Амброджо Маджоре, Милан, т. II, 305–332.

  • Sacco, L. 1801. Osservazione pratiche sull’uso del vajuolo Vacino, preservativo del vajuolo umano . Милан: Stamperia Italiana e Francese S. Zeno.

    Google Scholar

  • Sacco, L. 1803. Memoria sul Vacino unico mezzo per estirpareradmente il vajuolo umano diretta ai Governi Che amano la prosperità delle loro nazioni .Милан: Стамперия и Фондерия де Стефанис.

    Google Scholar

  • Sacco, L. 1809. Trattato di Vacinazione con osservazioni sul Giavardo e vajuolo pecorino . Милан: Tipografia Mussi.

    Google Scholar

  • Spongia, G.F. 1838. Di Francesco Fanzago nobile e medico padovano del suo secolo e de ’suoi scritti . Падуя: Совет. Cartallier e Sicca.

    Google Scholar

  • Винкельштейн, В. 1992. Не только деревенский врач: Эдвард Дженнер. Ученый. Эпидемиологический обзор 14: 1–15.

    Google Scholar

  • (PDF) Иконография и восковые модели в итальянской ранней вакцинации против оспы

    В 1803 году Сакко опубликовал вторую монографию

    о вакцинации: «Память о вакцине как

    уникальный метод радикального искоренения оспы,

    направлен на правительства, которые любят процветание

    своих наций » (Sacco 1803).Пруссия, Бавария и

    некоторые другие итальянские округа, такие как Парма, Лукка

    и Тоскана, приняли законы Итальянской Республики

    в отношении вакцинации, вдохновленные этой книгой

    Сакко (Ferrario 1858b, стр. 26). В этом тексте мы не находим никаких изображений

    , а основную цитату

    понимаем последовательные иконографические и восковые модели

    , вдохновленные Sacco. Он утверждал, что

    также должны быть проинструктированы акушерок о том, как проводить вакцинацию

    , чтобы они могли «привыкнуть» к различению

    настоящих и ложных пустул (Sacco 1803, p.36).

    После этого Сакко сказал:

    Чтобы привлечь внимание населения и, в первую очередь,

    врачей, хирургов и акушерок, и

    , чтобы избежать опасности получения сомнительных или

    вводящих в заблуждение результатов, следует приготовьте таблицы

    с хорошо раскрашенными рисунками или, еще лучше, две руки

    , сделанные воском, одна с пустулами настоящей вакцины

    , другая с ложными и аномальными пустулами

    . Эти фотографии следует размножить и отправить

    в каждый главный город для регулярного осмотра

    профессоров и акушерок (там же).

    Мы видим важность, которую Sacco придает

    изображениям и трехмерным восковым моделям. Он

    посоветовал местным администрациям создать восковые модели

    для широкого распространения, а также для врачей, хирургов

    и акушерок.

    В 1809 году Сакко опубликовал свой шедевр «Трактат о вакцинации

    с наблюдениями за жиром

    и оспой овец» (Sacco 1809), в котором он опубликовал

    тех «хорошо раскрашенных рисунков», которые он сохранил

    как лучший способ распространения необходимых

    знаний о практике вакцинации.Это была обширная монография

    , в которой он описал практику

    и несколько опытов вакцинации в

    14 главах и 224 страницах. Лимфа для вакцинации

    могла быть получена, согласно Сакко, в основном

    от коровьей оспы, но также и от аналогичных болезней лошадей

    (жир) и овец (оспа овец) (ivi, стр. 8). Сакко

    рассматривал вопрос о природе болезни,

    опровергая гипотезу, уже довольно распространенную в его период

    , что оспа была спонтанным внутренним заболеванием

    , вызванным «гниением» жидкостей.Он

    утверждал, что это инфекционное заболевание, передающееся

    через яйца микроскопических насекомых, которые могли жить

    вне организмов-хозяев в состоянии «очевидно

    мертвых» и распространяться в атмосфере (ivi ,

    с. 21–23). Он посвятил целую главу примерно

    человеческим «кожным изгнаниям», подобным оспе,

    , но этиологически другим, таким как ветряная оспа,

    скарлатина, краснуха и другие (ivi, стр.155–166).

    Он проанализировал «влияние вакцинации на увеличение популяции на

    » (ivi, стр. 167–171) и

    , он описал эксперименты по прививке вакцины

    другим животным (собакам, свиньям и другим). (ivi,

    pp. 172–178), микроскопические наблюдения и химические

    манипуляции с вакциной лимфой (ivi, pp. 179–190).

    Главный вопрос заключался в том, как и где

    извлечь полезную лимфу для получения идеальной вакцины

    , а не ложной.Было важно, чтобы

    было способно распознать настоящую пустулу по ложной

    , еще потому, что, по словам Сакко,

    основных, наиболее постоянных и характерных симптомов

    были ограничены только пустулами, а

    — остальными. где более подвижно (ivi, с. 45).

    Ложные пустулы у коров аналогичны

    коровьей оспе, но относятся к другому типу болезни

    (разновидность ветряной оспы). Если их лимфатическая система

    была привита человеку, они могли вызвать доброкачественную или злокачественную вакцину

    , доброкачественную или злокачественную в соответствии с ее вирулентностью

    , заболевание, которое не имело никакого защитного действия против оспы ivi, стр.72–75).

    У людей может быть ложная вакцина, также если лимфа

    , используемая для вакцинации, была извлечена из

    человеческой вакцины, дегенерированной пустулы (изъязвленной) или

    из плохого участка хорошей пустулы (в центре, а не

    в граница), что привело к появлению «вторичной ложной вакцины

    » (ivi, стр. 76–85).

    Итак, для того, чтобы «лучше говорить глазами своих

    читателей» (ivi, стр. 10), он опубликовал в своем «Трактате»

    четыре чудесных цветных таблички о пустулах у коров,

    лошадей. вакцины для овец и человека настоящие и

    поддельные (см. рис.7, 8, 9, 10).

    Пластинка вокруг пустул на сосках у коровы

    была по существу такой же, как у Sacco 1801

    Observation, которая представляла спонтанные и

    пустулы, вызванные инокуляцией (см. Рис. 7).

    Табличка о «смазке» должна была дать возможность

    читателям отличить это заболевание от других подобных

    высыпаний на копытах лошадей, таких как «Crepazze»,

    «Vesciconi». и «Риччуоли» (ivi, стр.135–136).

    F. Zampieri et al.

    123

    Разработка нового метода нейтрализации вируса осповакцины на основе экспрессии репортерного гена | Журнал инфекционных болезней

    Абстрактные

    В ожидании крупномасштабной вакцинации против оспы, клинических испытаний новых вакцин-кандидатов с улучшенными профилями безопасности и новых продуктов иммуноглобулина осповакцины (VIG) существует неотложная необходимость в разработке новых анализов для измерения иммунных ответов, специфичных для осповакцины.Классический тест для измерения нейтрализации осповакцины, тест нейтрализации уменьшения бляшек (PRNT), медленный, трудоемкий и сложный для проверки и переноса. Здесь мы описываем разработку нового анализа нейтрализации коровьей оспы, основанного на экспрессии репортерного гена, β-галактозидазы (β-Gal). Используя ранее сконструированный рекомбинантный вирус осповакцины-β-Gal, vSC56, мы разработали тест нейтрализации, который является быстрым, чувствительным и воспроизводимым. Считывание автоматизировано. Мы показываем, что нейтрализующие титры, ID 50 , для нескольких продуктов VIG, измеренные с помощью нашего анализа, были аналогичны титрам, полученным с помощью PRNT.Был установлен новый стандарт VIG Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов для распространения среди других лабораторий. Новый анализ послужит важным инструментом как для доклинических, так и для клинических испытаний новых противооспенных вакцин, а также для оценки терапевтических агентов для лечения побочных реакций, связанных с вакцинами.

    В связи с новой угрозой оспы как возбудителя биотерроризма [1–4] основные усилия предпринимаются в следующих областях: (1) разработка дополнительных запасов противооспенных вакцин на альтернативных клеточных субстратах (например,g., линии диплоидных клеток и клетки Vero), (2) разработка более аттенуированных штаммов осповакцины (в качестве кандидатов на вакцины для лиц с иммунодефицитом) и (3) производство иммуноглобулина более высокой осповакцины (VIG) для лечения или профилактики тяжелой формы осповакцины. -ассоциированные побочные реакции [5, 6]. Параллельно с этим важно разработать лабораторные анализы для оценки эффективности новых вакцин и продуктов VIG. Одним из ключевых тестов для оценки как гуморальных иммунных ответов в вакцинах, так и эффективности препаратов VIG является анализ нейтрализации коровьей оспы.Все классические анализы нейтрализации основаны на тестах нейтрализации уменьшения образования зубного налета (PRNT). Они медленные (4–7 дней), требуют относительно больших объемов исследуемых препаратов (поскольку они проводятся в 6- или 12-луночных планшетах) и в некоторой степени субъективны и зависят от оператора (поскольку считывание является визуальным) [7– 9]. Поэтому считается, что PRNT трудно стандартизировать, валидировать и передавать между лабораториями. Кроме того, из-за низкой пропускной способности в каждом анализе можно тестировать только ограниченное количество образцов, что делает эти тесты нецелесообразными для оценки сотен образцов из клинических испытаний.

    Мы разработали и стандартизировали новый тест для измерения нейтрализации коровьей оспы. Он основан на экспрессии репортерного гена, кодирующего бактериальный фермент бгалактозидазу (β-Gal), под контролем синтетического раннего / позднего промотора [10]. При выборе рекомбинантной осповакцины, экспрессирующей репортерный ген для одного раунда заражения, мы пришли к выводу, что ген, кодирующий фермент, обеспечит повышенную чувствительность по сравнению с другими репортерными генами, поскольку каждая молекула фермента преобразует несколько молекул субстрата в пределах временного интервала анализа.Мы демонстрируем, что новый анализ является быстрым (24 часа), одинаково чувствительным к PRNT, воспроизводимым и объективным. Новый анализ является высокопроизводительным и поддается валидации. Эти характеристики должны облегчить передачу анализа в клинические лаборатории для оценки нескольких образцов из клинических испытаний.

    Материалы и методы

    Препараты VIG

    Были протестированы два препарата VIG. Оба они были приготовлены из одной и той же объединенной плазмы, полученной от военнослужащих, вакцинированных вакциной Dryvax.Первый препарат, Baxter VIG (для внутримышечного введения) (16,5%), был изготовлен в 1994 г. путем осаждения холодным этанолом на основе метода Кон-Онкли для очистки иммунных глобулинов; второй препарат, Massachusetts Biological Laboratories (MBL) VIG, VIGIV (для внутривенного введения) (5%), был произведен в 2001 году аналогичными методами, но другим производителем.

    ПРНЦ

    Два PRNT сравнивали с анализом репортерного гена β-Gal.Эти анализы были выполнены двумя сотрудничающими лабораториями: BioReliance Corporation (спонсируемая Dynport Vaccine) и Acambis.

    В анализе BioReliance клетки VERO 76 (Американская коллекция типовых культур [ATCC] CRL-157) при пассажах 38–60 высевали на 6-луночные планшеты в количестве 5 × 10 4 клеток / мл в Eagle’s MEM (EMEM) с 10% эмбриональной бычьей сывороткой (FBS) и 1% L-глутамином за 72 часа до инокуляции. Образцы Baxter VIG и MBL VIGIV инактивировали нагреванием в течение 30 минут при 56 ° C. Вирус осповакцины был получен из рабочего банка, полученного из штамма Департамента здравоохранения Нью-Йорка, и добавлен к серийно разведенным тестовым образцам в концентрации 500 БОЕ / мл.Пробирки, содержащие смеси вирус-антитело, инкубировали на шейкере при 120 об / мин в течение 90 мин при 36 ° C в увлажненном инкубаторе CO 2 . Каждый анализ включал титрование вирусного исходного материала, образцов сыворотки положительного контроля и лунок отрицательного контроля (т.е. только среду, без вируса). Среду осторожно удаляли из клеток VERO 76 и 200 мкл смесей вирус-антитело или контролей добавляли в планшеты в трех экземплярах для каждого разведения. Планшеты встряхивали в течение 60 мин (период адсорбции) при 36 ° C в увлажненном CO 2 инкубаторе.После адсорбции наложение агарозы объемом 2 мл, состоящее из 35% агарозы SeaKem ME (1,8% раствор) и 65% (об. / Об.) Наложенной среды (2 × EMEM, 2% L-глутамина, 1% заменимых аминокислот, 10% FBS и 0,1% неомицин) добавляли в каждую лунку. Планшеты инкубировали в течение 48 ч при 36 ° C в увлажненном инкубаторе CO 2 , а затем 2 мл второго оверлея агарозы, состоящего из 62% оверлейной среды (см. Выше), 35% агарозы SeaKem ME (1,8% раствор). и 0,333% раствор нейтрального красного (Biologos). После дополнительной инкубации в течение 24 ч планшеты удаляли и защищали от света перед подсчетом.Бляшки подсчитывали с использованием трансиллюминатора белого света. Титр 50% -ной нейтрализации для каждого образца рассчитывали с помощью статистического анализа Minitab Probit и преобразовывали в ID 50 на основе концентрации неразбавленного продукта.

    В анализе Acambis клетки Vero высевали на 12-луночные культуральные планшеты при 3 × 10 5 клеток / мл в EMEM с 5% FBS (инактивированный нагреванием) (Hyclone), за 24 часа до использования в проба. Вирус осповакцины, использованный в анализе, был получен из вакцины Dryvax (штамм New York City Board of Health; Wyeth Laboratories) путем 2 пассажей в клетках MRC-5.Вирус разбавляли до 1300 ± 100 БОЕ / мл в EMEM с 10% инактивированной нагреванием FBS, буфером HEPES (20 ммоль / л), пенициллином (1000 единиц / мл) и стрептомицином (1 мг / мл). Испытуемые препараты и контроли серийно разбавляли (2-кратные разведения) до 2-кратной конечной концентрации и смешивали с вирусом в соотношении 1: 1; кроличья сыворотка против вакцины (WR) служила в качестве положительного контроля нейтрализации, тогда как среду для разведения использовали в качестве отрицательного контроля. Смеси вирус-антитело инкубировали в течение ночи (18 ± 2 ч) при 4 ° C в холодильнике.Сто микролитров смесей вирус-антитело добавляли к засеянным клеткам Vero в двух экземплярах, и планшеты инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C в инкубаторе CO 2 с периодическим покачиванием с последующим добавлением 1 мл верхнего слоя. среда, содержащая EMEM с 10% FBS плюс антибиотики. Планшеты инкубировали в течение 2 дней (48 ± 4 ч) при 37 ° C в инкубаторе CO 2 . Среду удаляли из всех лунок и заменяли 1 мл 1% кристаллического фиолетового в 70% метаноле на> 30 мин для фиксации и окрашивания клеток и инактивации вируса.Планшеты промывали водопроводной водой и сушили на воздухе. Бляшки подсчитывали с помощью стереомикроскопа над световым коробом; титр нейтрализации был определен как максимальное разведение исследуемого препарата, которое уменьшало среднее количество бляшкообразующих единиц на лунку на ≥50% по сравнению со средним количеством бляшкообразующих единиц во всех лунках отрицательного контроля, использованных в анализе.

    Анализ нейтрализации осповакцины на основе β-Gal (анализ β-Gal)

    Ячейки. В предварительных экспериментах сравнивали 3 линии клеток: клетки Vero 76, BSC-1 и Hela.Клетки HeLa были отобраны из-за более высокой экспрессии β-Gal после 18 часов инфицирования. Клетки HeLa (CCL-2) были получены от ATCC. Клетки поддерживали в EMEM (Mediatech) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS) (инактивированной нагреванием) (Sigma-Aldrich), 2 ммоль / л L-глутамина и забуференного солевого раствора Эрла (BSS), доведенного до содержания 1,5 г натрия. бикарбонат / л, 0,1 ммоль заменимых аминокислот / л, 1,0 ммоль пирувата натрия / л, пенициллин (500 МЕ / мл) и стрептомицин (500 мкг / мл) (Mediatech). Клетки HeLa использовали не более 14 пассажей.

    Титрование вирусов (в клетках BSC-1). Два рекомбинантных вируса были протестированы нашим анализом. vSC8 экспрессирует β-Gal под контролем позднего промотора осповакцины P11, а vSC56 экспрессирует β-Gal под контролем синтетического раннего / позднего промотора [10]. Титрование вируса проводили в клетках BSC-1 после инфицирования клеток в течение 2 дней с серийными разведениями исходного материала вируса. Бляшки подсчитывали после добавления 0,1% раствора кристаллического фиолетового в 20% этаноле. Для каждого запаса вируса было проведено по крайней мере 2 титрования, и среднее число использовалось в качестве титра исходного вируса.Для диспергирования агрегатов исходный вирус либо обрабатывали ультразвуком на льду в течение 15–30 с, либо обрабатывали в течение 30 минут при 37 ° C в объемном соотношении 1: 1 трипсином (0,25% в BSS Хэнкса) в растворе без кальция / магния. PBS. Каждый анализ нейтрализации включал ограниченное титрование вируса в клетках HeLa (2-кратные серийные разведения, охватывающие предполагаемый MOI для анализа).

    Установка для анализа нейтрализации (в клетках HeLa). В каждом анализе вирус инкубировали либо с тестируемыми образцами, либо с положительным и отрицательным контролями, серийно разведенными (5 × 2-кратные разведения) в EMEM с добавлением 10% FCS (инактивированный нагреванием).Смеси вирусных антител инкубировали в микропробирках (Sarstedt) в течение 1 ч при 37 ° C, а затем разливали в 96-луночные круглодонные планшеты, содержащие 2 × 10 5 клеток HeLa / лунку (4–6 повторов / разведение антител). Стандарт VIG Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) (MBL VIGIV лот 1; MBL / Dynport) обычно используется в качестве положительного контроля нейтрализации, тогда как объединенные образцы сыворотки от людей, не инфицированных вакциной, образцы сыворотки животных с преиммунным заболеванием и серийные разведения бычьей сыворотки раствор альбумина (БСА) (5%) использовали в качестве отрицательного контроля.Планшеты для титрования вирусов и планшеты для нейтрализации вирусов дополнительно инкубировали в течение 16 ч при 37 ° C в увлажненном инкубаторе CO 2 . Затем в каждую лунку добавляли двадцать микролитров 20% раствора детергента IGEPAL CA630 (Sigma-Aldrich) при энергичном перемешивании для лизиса клеток. Планшеты замораживали до месяца при -70 ° C. Перед ферментативным анализом планшеты полностью оттаивали и хранили при 4 ° C.

    В ранних экспериментах клетки HeLa обрабатывали цитозинарабинозидом (Ara C) (40 мкг / мл) (Sigma) после вирусной инфекции, чтобы подтвердить, что измеренная активность β-Gal была обусловлена ​​вновь экспрессированным белком (таблица 1).Ara C блокирует транскрипцию в зависимости от поздних промоторов коровьей оспы [10]. В последующих анализах обработка Ara C не применялась.

    Таблица 1.

    Активность

    γ-галактозидазы (γ-Gal) в экстрактах клеток HeLa после 18 ч инфицирования серийно разведенными рекомбинантными вирусами vSC8 и vSC56.

    Таблица 1.

    Активность γ-галактозидазы (γ-Gal) в экстрактах клеток HeLa после 18 ч инфицирования серийно разведенными рекомбинантными вирусами vSC8 и vSC56.

    Измерения активности β-Gal. Ферментативные реакции проводили в 96-луночных планшетах Immulon 2 (Thermo Labsystems). Каждый ферментативный анализ β-Gal включал построение стандартной кривой с использованием рекомбинантного фермента β-Gal (Roche Diagnostics). Исходный фермент (5 мг, содержащий 300 ед. / Мг) ресуспендировали в 0,5 мл PBS плюс 0,5 мл глицерина до концентрации 1500 единиц / мл. Аликвоты хранили при -20 ° C. Рабочий раствор β-Gal (15 Ед / мл) готовили в 50% растворе глицерина (в PBS), содержащем BSA (400 мкг / мл). Аликвоты хранили при -20 ° C.Ферментативную реакцию проводили в Z-буфере (98,55 мл 0,1 моль фосфата натрия / л, 1 мл 1 моль KCL / л, 0,1 мл 1 моль MgSO 4 / л и 0,35 мл β-меркаптоэтанола [Sigma]). . Исходный раствор мононатриевой соли хлорфенолового красного-β-D-галактопиранозида (CPRG) (Roche Diagnostics) готовили свежим для каждого анализа при 4 мг / мл в 0,1 моль фосфата натрия / л (pH 7,0).

    Для построения стандартной кривой рабочий раствор β-Gal (15 Ед / мл) был разбавлен 1: 100 (до 0,15 Ед / мл [150 мЕд / мл]), после чего последовали серийные 2-кратные разведения в Z буфер: PBS (соотношение 4: 1).Каждый аналитический планшет содержал стандарт β-Gal в концентрациях 0,3–18,75 мЕд / мл в двух экземплярах. Две лунки использовали как «пустые» лунки (содержащие Z-буфер / PBS в соотношении 4: 1). Для экспериментальных групп все лунки в столбцах с нечетными номерами содержали 180 мкл PBS, а все столбцы с четными номерами содержали 90 мкл Z-буфера.

    Супернатанты от каждой экспериментальной группы (см. Схему анализа выше) разбавляли следующим образом: 20 мкл переносили в лунку, содержащую 180 мкл PBS (разведение 1:10), смешивали с помощью нескольких пипеток, а затем 10 мкл переносили в лунку. соседняя лунка, содержащая 90 мкл Z-буфера (конечное разведение 1: 100).

    Двадцать микролитров свежего субстрата CPRG добавляли во все лунки, содержащие стандартную кривую β-Gal, и в лунки, содержащие экспериментальные образцы, разведенные в Z-буфере. Планшеты инкубировали в темноте в течение 30 мин при комнатной температуре и ферментативную реакцию останавливали добавлением 50 мкл 1 моль Na 2 CO 3 / л в каждую лунку. Оптическую плотность (OD) определяли при 575 нм с помощью ридера ELISA; машина была заглушена на пустые лунки (см. выше). Показания OD были перенесены в Microsoft Excel для анализа.Уравнение ( y = bx + a ) линейной части стандартной кривой и коэффициент начального разбавления (1: 100) использовали для преобразования значений OD каждого образца в активность β-Gal в миллиединицах на миллилитр, а Было рассчитано среднее значение ± стандартное отклонение для каждой группы повторов. Стандартное отклонение средств не должно превышать 15% от среднего значения (рисунок 1А).

    Рисунок 1.

    Создание стандартных кривых β-галактозидазы (β-Gal) и кривых ингибирования коровьей оспы. A , стандартная кривая β-Gal-фермента.Серийные разведения рабочего раствора β-Gal (18,75–0,15 мЕд / мл) добавляли в 96-луночный планшет в двух экземплярах. Субстрат хлорфенол красный-β-D-галактопиранозид добавляли на 30 мин при комнатной температуре в темноте и реакцию останавливали раствором 1 моль Na 2 CO 3 / л. Планшет считывали с помощью ридера ELISA при длине волны 575 нм, и Microsoft Excel использовали для построения линейной кривой. Все стандартные кривые имели R 2 ≥ 0,999. B , Кривая нейтрализации осповакцины.С активностью β-Gal в планшете только с вирусом (0,05 БОЕ / клетка), рассматриваемой как 100% (неингибированный контроль), каждая экспериментальная группа (при 5 разведениях иммуноглобулина осповакцины Massachusetts Biological Laboratories [MBL VIGIV]) была выражена как процент от контрольного значения. Microsoft Excel использовался для построения графика этого процента для каждого серийного разведения исследуемого препарата в сравнении с каждым логарифмическим разведением. Уравнение кривой использовали для расчета значений ID 50 (18 мкг / мл).

    Рисунок 1.

    Создание стандартных кривых β-галактозидазы (β-Gal) и кривых ингибирования коровьей оспы. A , стандартная кривая β-Gal-фермента. Серийные разведения рабочего раствора β-Gal (18,75–0,15 мЕд / мл) добавляли в 96-луночный планшет в двух экземплярах. Субстрат хлорфенол красный-β-D-галактопиранозид добавляли на 30 мин при комнатной температуре в темноте и реакцию останавливали раствором 1 моль Na 2 CO 3 / л. Планшет считывали с помощью ридера ELISA при длине волны 575 нм, и Microsoft Excel использовали для построения линейной кривой.Все стандартные кривые имели R 2 ≥ 0,999. B , Кривая нейтрализации осповакцины. С активностью β-Gal в планшете только с вирусом (0,05 БОЕ / клетка), рассматриваемой как 100% (неингибированный контроль), каждая экспериментальная группа (при 5 разведениях иммуноглобулина осповакцины Massachusetts Biological Laboratories [MBL VIGIV]) была выражена как процент от контрольного значения. Microsoft Excel использовался для построения графика этого процента для каждого серийного разведения исследуемого препарата в сравнении с каждым логарифмическим разведением. Уравнение кривой использовали для расчета значений ID 50 (18 мкг / мл).

    Активность β-Gal в планшете, содержащем только вирус, определяла уровень 100% -ной активности (то есть в неингибированном контроле), и активность β-Gal для каждой экспериментальной группы сравнивали с этим значением и выражали как процент от этого; для оптимальных результатов контрольная активность β-Gal должна находиться в диапазоне 100–300 мЕд / мл.

    Microsoft Excel использовали для построения процентного отношения контрольных значений для серийных разведений данного препарата антител в сравнении с логарифмическими разведениями. Уравнение для каждой кривой использовали для расчета значения ID 50 для каждого исследуемого препарата.В случае Baxter VIG и MBL VIGIV концентрации белка были известны, поэтому значения ID 50 можно было преобразовать в ID 50 в микрограммах на миллилитр (рисунок 1B).

    Создание диаграмм контроля качества и статистический анализ

    Для определения воспроизводимости анализа были проанализированы значения ID 50 для нескольких препаратов VIG, полученные с помощью нескольких анализов, и контрольные диаграммы были созданы с использованием программного обеспечения для статистического анализа JMP.Распределения значений ID 50 были проверены на нормальность перед анализом и составлением графиков. Результаты повторных испытаний образцов MBL VIGIV (5%) и Baxter VIG (16,5%) показаны на диаграммах Шухарта (диаграммы контроля качества) (рисунки 2A и 2B). Пределы, указанные на диаграммах, представляют собой пределы 2-κ, рассчитанные на основе данных, и они представляют собой верхний и нижний доверительные пределы ∼95%. Образец Baxter оказался гораздо более изменчивым, чем образец MBL. Статистический анализ дисперсии (для непарных значений) показал, что различия между значениями ID 50 для препаратов Baxter VIG и для препаратов MBL VIGIV были очень значимыми ( P <.0001).

    Рис. 2. Контрольные диаграммы иммуноглобулина осповакцины (VIG)

    , показывающие значения ID нейтрализующего антитела ID 50 в микрограммах на миллилитр для повторных тестов Массачусетской биологической лаборатории VIG (MBL VIGIV) ( A и B ) и Baxter VIG ( C ). A , Результаты 32 тестов, проведенных на MBL VIGIV, лот 2. B , Результаты 11 тестов, проведенных в соответствии со стандартом Управления по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) (i.е., MBL VIGIV лот 1). C , Результаты 17 экспериментов, проведенных с Baxter VIG. Горизонтальные линии отображают среднее значение выборки и 95% верхний доверительный предел (UCL) и 95% нижний доверительный предел (LCL). В среднем, в среднем.

    Рисунок 2. Контрольные диаграммы иммуноглобулина осповакцины (VIG)

    , показывающие значения нейтрализующего антитела ID 50 , в микрограммах на миллилитр, для повторных тестов Массачусетской биологической лаборатории VIG (MBL VIGIV) ( A и ). B ) и Baxter VIG ( C ). A , Результаты 32 тестов, проведенных на MBL VIGIV, лот 2. B , Результаты 11 тестов, проведенных по стандарту Управления по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) (т.е. MBL VIGIV, лот 1). C , Результаты 17 экспериментов, проведенных с Baxter VIG. Горизонтальные линии отображают среднее значение выборки и 95% верхний доверительный предел (UCL) и 95% нижний доверительный предел (LCL). В среднем, в среднем.

    Возможность валидации и переноса анализа

    Характеристики анализа, включая воспроизводимость и вариабельность теста, оценивали в соответствии с действующей стандартной рабочей процедурой.Наблюдалась изменчивость ≤15 лет внутри и между повторными лунками для данного образца, испытанного в одном планшете. При условии, что в тест включены соответствующие критерии исключения выбросов, вариативность внутри выборки вряд ли будет основным фактором вариабельности анализа. Стандартные кривые β-Gal показали хорошее соответствие между несколькими пластинами. Кроме того, между тестами вариабельность стандартной кривой была небольшой, поэтому можно было установить соответствующие пределы производительности.

    На сегодняшний день результаты указывают на возможность валидации анализа и передачи его в другие лаборатории. Критерии отклонения выбросов и спецификации для контроля качества теста находятся в стадии оценки. Соответствующие пределы должны быть установлены на (1) характеристики вирусного контроля и стандартной кривой для активности β-Gal, (2) вариабельность повторов при каждом разведении образца в рамках данного теста и (3) линейность кривой разведения. для эталонного стандарта находятся на рассмотрении.

    Результаты

    Выбор рекомбинантного вируса осповакцины и клеточного субстрата и проведение анализа нейтрализации. Панель экспрессирующих β-Gal рекомбинантных вирусов осповакцины (все на фоне WR) под контролем промоторов коровьей оспы или синтетического раннего / позднего промотора была создана в лаборатории Бернарда Мосса (Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний). и Национальные институты здоровья) [10]. Мы выбрали 2 из этих рекомбинантных вирусов, vSC8 и vSC56, для исследования.Для заражения клеток HeLa использовали серийно разведенные вирусы, используя либо необработанные, либо обработанные Ara C клетки. Активность β-Gal измеряли в клеточных экстрактах после 16–18 ч инфицирования, как описано в разделе «Материалы и методы». В vSC8 ген lacZ находится под контролем позднего промотора осповакцины, P11; следовательно, экспрессия полностью блокировалась обработкой Ara C. В vSC56 β-Gal экспрессируется под контролем синтетического раннего / позднего промотора; общая экспрессия была в 2 раза выше, чем в vSC8, и даже в присутствии Ara C остаточная активность β-Gal измерялась, как описано в другом месте [10].Важно отметить, что при очень низких MOI (≤0,06 БОЕ / клетка) в клетках, обработанных Ara C, не измерялась остаточная активность β-Gal (таблица 1 и данные не показаны). Мы выбрали vSC56 для дальнейшей разработки нашего нового анализа нейтрализации коровьей оспы. Во всех экспериментах, проведенных в данном исследовании, использовались значения MOI 0,05–0,0125 БОЕ / клетка. Каждый анализ включал титрование вируса, чтобы гарантировать целостность вирусного запаса. После нескольких анализов мы определили, что для обеспечения воспроизводимости контрольный (т.е. не ингибированный) вирус vSC56 в клетках HeLa должен давать значения β-Gal 100–300 мЕ / мл.Мы также протестировали другие клеточные линии, включая Vero 76 и BSC-1. Активность β-Gal, измеренная в лизатах клеток HeLa после 16–18 ч инфицирования, была выше, чем у двух других клеточных линий (данные не показаны). Однако титры нейтрализации (т.е. значения ID 50 ) были аналогичными (таблица 2).

    Таблица 2.

    Сравнение значений ID 50 иммунных глобулинов осповакцины (VIG): Massachusetts Biological Laboratories VIG (MBL VIGIV), лоты 1 и 2, и новый стандарт Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA).

    Таблица 2.

    Сравнение значений ID 50 иммуноглобулинов осповакцины (VIG): Massachusetts Biological Laboratories VIG (MBL VIGIV), лоты 1 и 2, и новый стандарт Управления по контролю за продуктами и лекарствами (FDA).

    Для характеристики анализа нейтрализации мы первоначально использовали 2 препарата VIG, которые были приготовлены из одной исходной плазмы. Один препарат, Baxter VIG, был изготовлен в 1994 году для внутримышечного введения, а другой продукт, MBL VIGIV, был произведен совсем недавно для внутривенного введения.После определения динамического диапазона для этих продуктов мы провели несколько анализов нейтрализации в течение 18 месяцев. Мы использовали человеческий альбумин в качестве отрицательного контроля в тех же концентрациях, что и для препаратов Baxter VIG и MBL VIGIV.

    Воспроизводимость анализа была установлена ​​путем создания диаграмм контроля качества (см. «Материалы и методы»), в которых были указаны среднее, верхнее и нижнее 95% доверительные пределы для препаратов MBL VIGIV (рис. 2A) и Baxter VIG (рис. 2C). определенный.MBL / Dynport недавно предоставила Центру оценки и исследований биологических препаратов (CBER) отдельную партию MBL VIGIV (т.е. лот 1) с целью подготовки нового стандартного референтного реагента FDA VIG, который теперь доступен для внешних лабораторий в процесс создания анализов нейтрализации коровьей оспы. Было обнаружено, что значение ID 50 для стандарта FDA аналогично значению для предыдущей партии MBL VIGIV (рисунок 2B и таблица 2). Важно отметить, что стандарт FDA может выдерживать 2 цикла замораживания и оттаивания без потери активности (таблица 2).

    Сравнение анализов нейтрализации β-Gal и PRNT осповакцины. В рамках характеристики нового теста на нейтрализацию вакцины было важно сравнить наши результаты с результатами, полученными с помощью PRNT. Поскольку лаборатории проводят PRNT по-разному, аликвоты Baxter VIG и MBL VIGIV были предоставлены 2 другим лабораториям (Acambis и BioReliance). Как видно из таблицы 3, значения ID 50 MBL VIGIV, которые были получены в нашем анализе нейтрализации β-Gal, проведенном либо с клетками HeLa (32 эксперимента), либо с клетками Vero 76 (4 эксперимента), были очень хорошими. совпадают со значениями, полученными независимо в двух других лабораториях, даже несмотря на то, что каждая из двух других лабораторий проводила PRNT с другим штаммом коровьей оспы и другим протоколом (см. Материалы и методы).Кроме того, как в нашем анализе, так и в PRNT, проведенном BioReliance, статистически значимая разница ( P <0,0001) между значениями ID 50 для Baxter VIG и значениями для MBL VIGIV (63 ± 25 и 25 ± 11 мкг / мл, соответственно) (таблица 4). Таким образом, мы установили, что недавно разработанный анализ репортерного гена β-Gal столь же чувствителен, как и традиционные PRNT, является более быстрым (24 часа) и генерирует значения ID 50 , аналогичные тем, которые генерируются PRNT.

    Таблица 3.

    Сравнение анализов нейтрализации коровьей оспы, проведенных в различных лабораториях, с иммуноглобулином против осповакцины, партия 2.

    Таблица 3.

    Сравнение анализов на нейтрализацию осповакцины, проведенных различными лабораториями, с иммуноглобулинами против осповакцины партии Массачусетс Биологические лаборатории 2

    Таблица 4.

    Сравнение нейтрализации коровьей оспы иммуноглобулином вакцины (VIG): Massachusetts Biological Laboratories VIG (MBL VIGIV) и Baxter VIG.

    Таблица 4.

    Сравнение нейтрализации коровьей оспы иммуноглобулином вакцины (VIG): Massachusetts Biological Laboratories VIG (MBL VIGIV) и Baxter VIG.

    Применение анализа нейтрализации β-Gal: скрининг образцов человека. Одним из важных применений нового анализа будет оценка эффективности новых противооспенных вакцин путем измерения титров нейтрализации коровьей оспы после иммунизации. С этой целью мы получили 20 образцов сыворотки от людей, которым известно, что они были вакцинированы против оспы.В качестве отрицательного контроля мы использовали объединенные образцы сыворотки, которые были получены от невакцинированных детей и которые хранились в CBER в качестве контролей для других оценок вакцины. Стандарт FDA VIG служил в качестве внутреннего положительного контроля. Все образцы инактивировали нагреванием в течение 30 мин при 56 ° C. Результаты представлены в таблице 5. Никакой вирусной нейтрализации не наблюдалось в присутствии объединенных образцов сыворотки отрицательного контроля (индивидуум 21; таблица 5). Результаты экспериментов представлены в 4 группах: в группу 1 вошли люди, получившие однократную (известную) вакцинацию от оспы в детстве ≥25 лет назад; в группу 2 вошли лица, получившие> 1 прививку от оспы, последняя вакцинация была ≥20 лет назад; в группу 3 вошли лица, вакцинированные в детстве, но получившие бустер-вакцинацию ≤5 лет назад; а в группу 4 вошли молодые люди, которые только недавно получили первичную вакцинацию Dryvax.Результаты показывают, что наш анализ достаточно чувствителен, чтобы обнаруживать даже низкие уровни вирусного ингибирования (люди 5 и 20; таблица 5). Интересно, что мы обнаружили, что даже спустя 25 лет после вакцинации у некоторых людей сохранялись высокие титры антител, нейтрализующих коровью вакцину. Значения ID 50 в микрограммах на миллилитр были рассчитаны на основе расчетного общего IgG в сыворотке человека, составляющего 10 мг / мл (таблица 5, столбец 4, в скобках). Многие значения находились в диапазоне, аналогичном диапазону, полученному с MBL VIGIV; однако у некоторых людей в группах 1 и 2 были измерены низкие ингибирующие титры, что свидетельствует о распаде с течением времени.Большинство людей, получивших ревакцинацию не более 3 лет назад, имели высокие титры нейтрализации. Мы также обнаружили, что вакцинированные лица, которые были недавно праймированы и у которых была взята кровь через 10–20 дней после вакцинации, имели разные результаты. Один вакцинированный (человек 18) имел высокий титр нейтрализации, но 2 других (люди 19 и 20) имели очень низкие титры нейтрализации. Размер популяции, из которой были взяты образцы, был небольшим, но данные согласуются с предыдущим отчетом, описывающим результаты недавнего клинического исследования, в котором 60 серонегативных людей были рандомизированы для получения неразбавленных, разведенных 1:10 или 1 : 100 разведенных вакцин Dryvax [11].В этом исследовании наблюдалась значительная вариабельность титров нейтрализации, которая не зависела от введенной дозы.

    Таблица 5.

    Пятидесятипроцентные титры нейтрализации коровьей оспы в образцах сыворотки, определенные с помощью анализа нейтрализации коровьей оспы на основе β-галактозидазы.

    Таблица 5.

    Пятидесятипроцентные титры нейтрализации коровьей оспы в образцах сыворотки, определенные с помощью анализа нейтрализации коровьей оспы на основе β-галактозидазы.

    Обсуждение

    В нашем исследовании описан новый анализ нейтрализации вируса осповакцины, предназначенный для замены PRNT, которые являются трудоемкими и требуют 4–7 дней для завершения.Мы продемонстрировали, что анализ репортерного гена β-Gal с использованием рекомбинантного вируса осповакцины, vSC56, является быстрым (24 часа), чувствительным и воспроизводимым и дает результаты, аналогичные результатам, полученным с помощью двух различных PRNT. Поскольку считывание представляет собой ферментативную реакцию, приводящую к изменению цвета субстрата, его можно прочитать с помощью прибора для считывания ELISA, который в настоящее время доступен в большинстве клинических лабораторий. Этот результат является объективным и улучшается за счет включения стандартной кривой β-Gal в каждый анализ.Таким образом, новый анализ должен легко проверяться и передаваться в другие лаборатории. Это двухэтапный анализ, который позволяет замораживать чашки перед ферментативной реакцией. Это свойство анализа предоставит значительное преимущество лабораториям, которые решат создать несколько групп экспериментальных образцов сыворотки последовательно, а затем запустить все ферментативные реакции в одной партии. Это также позволяет исследователям повторить ферментативную реакцию с теми же планшетами для подтверждения. Новый анализ достаточно чувствителен, чтобы обнаруживать нейтрализующие антитела как с высоким, так и с низким титром в клинических образцах сыворотки.Кроме того, этот анализ можно использовать для скрининга препаратов человеческого иммуноглобулина, вводимого внутривенно, в качестве потенциальной резервной копии VIG в случае нехватки, вызванной крупномасштабной кампанией вакцинации против оспы. Такой отбор был инициирован CBER.

    Вирус осповакцины продуцирует несколько инфекционных форм: внутриклеточный зрелый вирус (IMV), вирус внутриклеточной оболочки, ассоциированный с клеткой вирус с оболочкой и вирус с внеклеточной оболочкой (EEV). Форма IMV представляет собой большинство инфекционных потомков и остается в цитоплазме инфицированных клеток до лизиса.Форма EEV высвобождается из клетки и обладает дополнительной липидной оболочкой с ≥10 ассоциированными белками, отсутствующими в форме IMV [12]. В большинстве запасов вируса осповакцины, а также в препарате вакцины (штамм Wyeth) IMV является преобладающей формой, тогда как EEV составляет менее 10% инфекционных вирионов. Таким образом, PRNT, а также наш анализ репортергена, в первую очередь измеряют нейтрализацию IMV. Попытки создать запасы вируса коровьей оспы, обогащенные формой EEV, столкнулись с множеством трудностей, поскольку внешняя мембрана EEV представляет собой рыхлую и чрезвычайно хрупкую структуру [13], которая очень восприимчива к физическим манипуляциям.Однако титры нейтрализации вируса осповакцины, измеренные с помощью PRNT и нашего анализа, хорошо коррелируют с количеством вакцины (исторические данные [11, 14] и наши неопубликованные данные). В текущих исследованиях мы обнаружили очень хорошую корреляцию между титрами нейтрализации коровьей оспы, измеренными нашим анализом, и временем до исчезновения поражений вакцины Dryvax у приматов [17].

    Таким образом, анализы нейтрализации коровьей оспы in vitro обеспечивают хорошую оценку потенциала нейтрализации коровьей оспы в образцах иммунной сыворотки, а наш анализ обеспечивает быструю, легкую для проверки и высокопроизводительную альтернативу PRNT.Он подходит для скрининга нескольких образцов, полученных в результате клинических испытаний новых вакцин и препаратов VIG.

    Хотя Baxter VIG и MBL VIGIV были получены из одной и той же исходной плазмы, было обнаружено, что их значения ID 50 значительно различаются при измерении с помощью PRNT (Bio-Reliance) или анализа γ-Gal. Оба продукта производятся одинаково. Таким образом, наиболее вероятным объяснением более низкой активности Baxter VIG по нейтрализации вакцины in vitro (16,5%) по сравнению с MBL VIGIV (5%) является тот факт, что он был произведен 8 лет назад и хранился в жидком виде. .Недавно мы подтвердили, что в анализе летальности мышей SCID in vivo Baxter VIG обладает меньшей защитой, чем MBL VIGIV (D.E.S., H.G., et al., Неопубликованные данные).

    Рекомбинантные вирусы осповакцины, экспрессирующие другие репортерные гены, такие как зеленый флуоресцентный белок (GFP) и люцифераза [15] [16], также могут быть полезны для создания высокопроизводительных и чувствительных анализов нейтрализации. Предварительные исследования с индуцибельным рекомбинантом GFP-коровьей оспы продемонстрировали хорошую чувствительность при MOI 0.05 БОЕ / клетка в 48-часовом анализе нейтрализации. Значения ID 50 , полученные для стандарта FDA VIG и для нескольких других препаратов VIG, хорошо согласовывались со значениями, полученными с помощью анализа γ-Gal (N.A.B., J.S., H.G., неопубликованные данные). Дальнейшие исследования с использованием образцов сыворотки человека с высоким, средним и низким титрами нейтрализующих вакцину антител потребуются для стандартизации этого анализа и установления его динамического диапазона.

    Анализы на основе репортерных генов также могут быть полезны при создании моделей на мышах для измерения вирусной нагрузки после заражения коровьей оспой у животных после активной или пассивной иммунопрофилактики.Эти рекомбинантные вирусы предоставляют нам отличные инструменты для помощи в оценке защитной активности, как in vitro, так и in vivo, новых реагентов против осповакцины.

    Благодарности

    Мы благодарим Бернарда Мосса (Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний и Национальные институты здравоохранения) за предоставление вирусов vSC56 и vSC8. Мы благодарим докторов наук. Бэзил Голдинг, Джерри Вейр и Джуди Билер за критическое рецензирование рукописи. Мы благодарим Глена Драбика из Acambis за проведение PRNT.

    Список литературы

    1 ..

    Надвигающаяся угроза биотерроризма

    ,

    Science

    ,

    1999

    , vol.

    283

    (стр.

    1279

    82

    ) 2 ..

    Оспа: клинико-эпидемиологические особенности

    ,

    Emerg Infect Dis

    ,

    1999

    , vol.

    5

    (стр.

    537

    9

    ) 3.,.

    Последние события и наблюдения, касающиеся уничтожения вируса оспы в 2002 г.

    ,

    Clin Infect Dis

    ,

    2001

    , vol.

    33

    (стр.

    1057

    9

    ) 4.,,, Et al.

    Оспа как биологическое оружие: медицина и общественное здравоохранение. Рабочая группа по гражданской биозащите

    ,

    JAMA

    ,

    1999

    , т.

    281

    (стр.

    2127

    37

    ) 5.,,,.

    Осложнения вакцинации против оспы, 1968

    ,

    N Engl J Med

    ,

    1969

    , vol.

    281

    (стр.

    1201

    8

    ) 6.,,,.

    Реакции на вакцинацию против оспы, профилактика и лечение осложнений

    ,

    Педиатрия

    ,

    1975

    , vol.

    55

    (стр.

    342

    7

    ) 7 ..

    Влияние инкубационного периода вирус-сыворотка на титры сыворотки нейтрализации вируса осповакцины

    ,

    J Biol Stand

    ,

    1987

    , vol.

    15

    (стр.

    389

    92

    ) 8.,,.

    Проспективное исследование сывороточных антител и защиты от оспы

    ,

    Am J Trop Med Hyg

    ,

    1972

    , vol.

    21

    (стр.

    214

    8

    ) 9 ..

    Применение векторов вируса оспы для вакцинации: обновление

    ,

    Proc Natl Acad Sci USA

    ,

    1996

    , vol.

    93

    (стр.

    11349

    53

    ) 10.,,.

    Компактный синтетический ранний / поздний промотор вируса коровьей оспы для экспрессии белка

    ,

    Biotechniques

    ,

    1997

    , vol.

    23

    (стр.

    1094

    7

    ) 11., Et al.

    Дозозависимые эффекты противооспенной вакцины

    ,

    N Engl J Med

    ,

    2002

    , vol.

    346

    (стр.

    1275

    80

    ) 12 ..

    Значение вируса с внеклеточной оболочкой в ​​распространении осповакцины in vitro и in vivo

    ,

    J Gen Virol

    ,

    1980

    , vol.

    50

    (стр.

    89

    100

    ) 13.,,,,,.

    Новый метод криоэлектронной микроскопии с использованием иммунозолота для исследования структуры внутриклеточных и внеклеточных форм вируса осповакцины

    ,

    Embo J

    ,

    1996

    , vol.

    15

    (стр.

    2343

    55

    ) 14.,,, Et al.

    Иммунологические ответы на вакцины против осповакцины, вводимые разными парентеральными путями

    ,

    J Infect Dis

    ,

    1997

    , vol.

    175

    (стр.

    756

    63

    ) 15.,,, Et al.

    Вирус осповакцины использует микротрубочки для движения к поверхности клетки

    ,

    J Cell Biol

    ,

    2001

    , vol.

    154

    (стр.

    389

    402

    ) 16.,,.

    Биология аттенуированного модифицированного вируса осповакцины Рекомбинантный вектор Ankara у мышей: судьба вируса и активация B- и T-клеточного иммунного ответа по сравнению со штаммом Western Reserve и преимущества в качестве вакцины

    ,

    J Virol

    ,

    2000

    , vol. .

    74

    (стр.

    923

    33

    ) 17.,,, Et al.

    Моделирование более безопасной схемы вакцинации против оспы для пациентов со СПИДом у макак с ослабленным иммунитетом

    ,

    J Infect Dis

    Заметки автора

    © 2003 Американского общества инфекционистов

    Проблема не в этом вирусе — мы —

    Фотография любезно предоставлена ​​Getty Images

  • Department
  • Как COVID-19 обнажил наше коллективное отсутствие сочувствия.

    Линдси Б. Кинг •

    Это одно из моих самых ранних воспоминаний, хотя я не знаю почему. Я понятия не имею, сколько мне было лет и что было в шраме размером с десять центов на плече моей мамы, который привлек мой взгляд. Мои пальцы проследили и вернули вмятину на ее безупречной коже. Я помню, как спросил ее, что это было. Она объяснила мне, как это делают родители, когда они пытаются сказать правду, не пугая своих детей, что когда она была маленькой девочкой, была болезнь, от которой всем нужно было сделать прививку, чтобы они не заболели. .Должно быть, в моих глазах промелькнул страх, потому что она сказала: «Не волнуйся. Тебе не нужно его получать. Теперь эта болезнь ушла ».

    Вирус оспы действительно был искоренен во всем мире в 1980 году, примерно через год после моего рождения. Моим родителям не пришлось тащить меня с собой в арсенал Национальной гвардии, чтобы получить эту вакцину — как это сделали родители моей мамы в конце 1950-х или начале 1960-х годов, — чтобы защитить меня от этой обезображивающей и часто смертельной инфекции. Когда я появился на свет, в этой стране полиомиелит тоже был смертельной угрозой.Однако мой педиатр все же воткнул мне иглу в ногу, еще один безотказный гвоздь в пресловутом гробу этой болезни.

    Партнерский контент

    Хотя я не могу винить ее за неточность в обращении с малышом, моей маме, вероятно, следовало сказать, что мне не нужно было бы получать вакцину , в частности, вакцину . Потому что правда заключалась в том, что в детстве мне сделали прививку от множества неприятных болезней, включая дифтерию, столбняк, корь, эпидемический паротит и краснуху. Как и большинство американских представителей поколения Икс, я плохо понимал дикую природу вирусов, если не считать недолгой драки с ветрянкой, похожей на Джексона Поллока.Так было, конечно, до тех пор, пока СПИД не начал убивать десятки тысяч американцев в конце 80-х и не проник в национальное сознание до конца 90-х. Даже тогда я, как и многие другие, испытал вирус, вызывающий СПИД, в дезинфицированной манере, которая транслировалась в вечерних выпусках новостей. Я никогда не боялся этого, потому что у меня не было высокого риска, и вирус не передавался легко. А поскольку антиретровирусные препараты сделали ВИЧ управляемым хроническим заболеванием за последние 25 лет, большинство американцев, вероятно, больше беспокоятся о диабете, чем о ВИЧ.

    Это чувство безопасности — одно из благословений и проклятий современной медицины в промышленно развитой стране. За исключением сезонного гриппа, в Соединенных Штатах не часто случаются массовые вспышки смертельных инфекционных заболеваний, вирусов или других заболеваний. Американцы — благодаря легкодоступным антибиотикам, политике полуобязательной вакцинации и удачному географическому положению (тропические регионы с их богатым биоразнообразием предоставляют широкие возможности для патогенов перейти от диких животных к людям с разрушительным эффектом) — в основном были способны мыслить геморрагических лихорадок, тяжелых диарейных заболеваний и острых респираторных синдромов, которые случаются там .

    По крайней мере, так было до тех пор, пока в США не появился новый коронавирус где-то в конце 2019 или начале 2020 года.

    В 1999 году я был 20-летним студентом колледжа , которому посчастливилось учиться за границей по многонациональной программе. В тесноте в дальнем заднем ряду фургона с примерно 10 другими студентами я читал книгу Ричарда Престона The Hot Zone . Как начинающий писатель, я слышал, что в основе документального триллера 1994 года о появлении вируса Эбола была статья в газете New Yorker , но я даже не читал суперобложку, пока не стал в самолете между Момбасой и Найроби в Кении.Пока фургон натыкался на то, что считалось автострадой, ведущей из столицы Кении, я боролся с автомобильной болезнью, чтобы продолжить перелистывать самую страшную книгу, которую я когда-либо читал.

    Один отрывок особенно заставил меня задуматься: Престон объяснил, что ВИЧ, скорее всего, возник из Центральной Африки, спровоцированный вторжением человека в тропические леса и неуклонно распространился по недавно построенному шоссе с востока на запад между Момбасой, Кения, и Киншасой, Заир ( теперь Конго). «Простите меня», — крикнул я водителю нашего фургона.«Можете ли вы сказать мне, по какому пути мы сейчас идем?» С красивым британским английским акцентом наш кенийский водитель ответил, что мы находимся на шоссе Момбаса-Лагос или Трансафриканском шоссе 8. У Престона был другой термин для обозначения той же самой ленты тротуара: шоссе Киншаса, своего рода метафора. для распространения СПИДа в Африке.

    Чтение The Hot Zone во время путешествия по шоссе Момбаса-Лагос, как я помню, было похоже на круиз по реке Миссисипи и открытие Приключения Гекльберри Финна в первый раз.Ужасы соскакивают со страниц обеих книг. И, как выясняется, вирусы мало чем отличаются от расизма: коварные, изнурительные и повсюду. Фактически, продолжая читать, я узнал, что примерно в 150 милях от того места, где я остановился на ночь, в деревенском коттедже возле озера Накуру, было рассадником совершенно другой инфекции. Хотя никто не знает, из какого природного источника происходит марбургский вирус, несколько случаев передачи смертельной геморрагической лихорадки были прослежены до национального парка Маунт-Элгон.Я не планировал исследовать Mt. Пещеры Элгона, которые, как свидетельствуют неофициальные данные, могли служить убежищем для вируса, но мои 100 дней за границей позволят мне в дальнейшем столкнуться с другими болезнями, вызванными микробами, которые я никогда не видел ни в одном из пяти городов США, в которых я жил, включая Денвер. .

    Перед тем, как я отправился в путешествие, мне было воткнуто не менее семи игл в мышцы плеча — защита от таких болезней, как желтая лихорадка, гепатит А и В, полиомиелит и столбняк. Мне также пришлось принимать таблетки для борьбы с брюшным тифом (бактерия) и малярией (паразит).Но необходимость в профилактических препаратах и ​​вакцинациях, которые проводила медсестра в стерильной туристической клинике, казалась в лучшем случае теоретической. Я полагаю, что отчасти именно эта абстрактность позволяет некоторым американцам — и слишком многим колорадцам — отказываться от прививок. Путешествие по развивающемуся миру сделало для меня эту потребность очень конкретной.

    В Гаване, Куба, неочищенные сточные воды просачивались сквозь половицы в мастерской художника, который мы посетили — нередкое явление, — сказал он, смущенный, — заставив меня почувствовать укол от прививок от гепатита А.В Баии, Бразилия, мы нанесли Дит на кожу, чтобы избежать лихорадки денге, переносимой комарами, геморрагической лихорадки (с вакциной, доступной в ограниченном количестве), которая выросла на 672 процента в период с 2018 по 2019 год, через 20 лет после моего визита. В Варанаси, Индия, где полиомиелит был ликвидирован только недавно, я видел, что вирус делает с человеческим телом: он атакует центральную нервную систему, ослабляя спинной мозг и вызывая паралич и ужасные мышечные контрактуры, обезображивающие конечности. Когда я наклонился, чтобы поговорить с молодым человеком на улице — его ноги искривлены, он научился ходить руками, — я очень ясно понял одну вещь, даже когда был 20-летним.Этот человек был в точности как я: плоть, кровь, потребности, желания, чувства. Разница была в географии. Он родился в развивающейся стране, где политическая коррупция, архаичная кастовая система и бедность были (и остаются) повсеместными — и где здравоохранение отчаянно отставало. Случайно я родился в Соединенных Штатах, где, безусловно, существовали взяточничество, неравенство, нищета и случайный доступ к медицинскому обслуживанию, но где был также, по крайней мере, относительно свободный доступ к потенциально спасающей жизнь вакцине от полиомиелита.

    Путешествуя по другим странам, включая Вьетнам, Малайзию и Китай, я не видел инфекционных заболеваний воочию, но я бродил по так называемым влажным рынкам, эндемичным для Азии. Там есть зверинец, состоящий как из живых, так и из мертвых животных, некоторых из которых можно было бы назвать «дикими», выставлены на обозрение и выставлены на продажу для потребления человеком или в качестве домашних животных. Но мокрые рынки — это также просто рынки, где люди посещают мясника, продуктовую лавку или торговца рыбой. Для многих азиатов «мокрые» рынки не так уж сильно отличаются от, скажем, Costco.Для туриста мокрые рынки — это цирк достопримечательностей, запахов, звуков, вкусов и текстур. Однако для эпидемиолога они представляют собой чашки Петри для возможных патогенов, которые могут передаваться от животных к человеку. Несколько вирусных инфекций с пандемическим потенциалом были обнаружены на влажных рынках Китая за последние два десятилетия.

    Тогда вполне естественно, что вирусологи и эпидемиологи стали с большим подозрением относиться к микробам, которые, возможно, искали новых хозяев, на оптовом рынке морепродуктов Хуанань в Ухане, расположенном в провинции Хубэй, где, как полагают, SARS-CoV-2 впервые заразил людей. .Хотя исследователи еще не установили окончательной связи между новым коронавирусом и рынком морепродуктов, некоторые эксперты говорят, что это может быть эпицентром болезни, от которой по состоянию на 13 мая заразилось 4 170 424 человека и погибло 287 399 человек во всем мире, в том числе более 20 000 случаев и 1009 смертей в Колорадо.

    Из моей квартиры на четвертом этаже в Платт-парке, я вижу оживленный перекресток Восточного Миссисипи-авеню и Южного Бродвея. Обычно я тоже это слышу. Но когда в конце марта вступил в силу приказ Денвера не выходить из дома — за которым последовала аналогичная директива по всему штату — звуки гневных гудков, скрипучих поломок и плохо заглушенных двигателей в основном прекратились.Однако, я думаю, преобладание сирен скорой помощи заметно увеличилось. Собака, которая живет в квартире надо мной, воет в свое согласие каждый раз, когда скорая помощь или пожарная машина с криком проезжают мимо нашего дома.

    Сидя в этой квартире площадью 730 квадратных футов — стены сужаются тем сильнее, чем дольше я нахожусь один на карантине — я размышляю обо всех способах, которыми я столкнулся с остатками болезни или возможностью болезни, но на самом деле опасность заражения заболеванием человек.До сих пор здесь, в Соединенных Штатах.

    Пока я пишу это, трагедии нарастают. Тридцать тысяч мертвых в Италии. Случаи заболевания снова растут в Китае. В Нью-Йорке скончались более 21000 человек. Здесь, в Колорадо, мы зарегистрировали 1000 смертей на момент публикации в печати. Но есть еще одно бедствие — гораздо менее заметное, но, возможно, столь же серьезное, — которое американцам, возможно, придется признать, прежде чем этот вирус утихнет. Наше коллективное отсутствие сострадания и сочувствия не только обнажило пандемию, но и, вероятно, спровоцировало ее.

    Поскольку этот вирус поразил тысячи людей в Китае, мы не смогли увидеть наших дедов в лицах их дедов. Поскольку медицинские работники в Северной Италии заражались катастрофическими темпами, мы отказывались предвидеть такую ​​судьбу наших собственных врачей, медсестер и медицинских работников. Когда врачи всего мира начали замечать, что люди с ослабленным иммунитетом более восприимчивы к болезни, некоторые американцы предположили, что они могут быть жертвоприношениями. Когда Нью-Йорк превратился из одного из величайших городов мира в эпицентр болезни, мы пожали плечами, когда некоторые, в том числе президент, предложили просто закрыть этот район.Когда тела начали скапливаться в пустующих больничных палатах Детройта, мы не вздрогнули от этой мысли и не задались вопросом, знают ли близкие этих людей, где они находятся.

    Большая часть этого уникального американского ответа неудивительна, учитывая нашу историческую тенденцию нерешительно, , что очень печально, , а затем отмахиваться от этого как проблемы, которые случаются там . ВИЧ и Эбола были дилеммами Африки. Когда случился птичий грипп, мы проигнорировали его как повседневную эпидемию Азии.Полиомиелит — это проблема Индии, которую нужно исправить. Поэтому не было большим шоком, когда наша апатия друг к другу здесь, дома, разоблачилась, когда новый коронавирус не принял во внимание наши границы и проник в наши клетки. Для весенних праздников и некоторых прихожан остановить распространение смертельного вируса на американской земле не было приоритетом номер один. Для правых в Денвере, которые протестовали против предписания штата оставаться дома, маниакально кричать на стойких, одетых в скрабы людей, которые выступали против протеста, почему-то не было неприемлемо.Для политиков — по обе стороны прохода — COVID-19 стал настоящей катастрофой в и без того спорном году выборов. Для оппортунистов страх и хаос облегчили завышение цен на дезинфицирующее средство для рук или удобное объявление абортов несущественными операциями.

    Все это показало, что вирусы среди нас — новый коронавирус, Эбола, Марбург, SARS, MERS и все страшные ошибки, о которых мы еще не знаем, — не являются настоящей проблемой. Мы. Если бы мы вообще обращали внимание на то, как мы стали нечувствительны к бедам других — будь то коллеги из Колорада, американцы или просто люди, — мы бы осознали, что опасность действительно исходит от нас.

    Тем не менее, было бы несправедливо и, что более важно, неточно сказать, что американцы полностью утратили способность проявлять изящество. Только здесь, в Колорадо, я знаю врачей и медсестер, которые вызвались руководить линиями тестирования автомобилей, потому что им не все равно. Я знаю журналистов, которые работали сверхурочно, чтобы донести важную информацию до жителей Колорада — потому что им не все равно. Я разговаривал с людьми, которые сдавали кровь и шили маски — потому что им не все равно. Я знаю, что есть исследователи в Форт-Коллинзе, работающие над вакциной, врачи в Денвере, разрабатывающие новые методы лечения, и местные предприятия, создающие наборы для экспресс-тестов.Я слышал 8 часов вечера. воют и видели, как сотрудники продуктового магазина изо всех сил стараются быть добрыми к покупателям, наблюдая, как одна из моих соседок дала своему почтовому работнику тарелку с печеньем, и улыбалась работе детей, которые нацарапали мелом на тротуарах «Мойте руки» в моем районе. Люди делают все это, потому что им не все равно.

    Но это индивидуальные действия, и какими бы героическими и важными они ни были, мы должны коллективно согласиться с тем, что там больше нет такого места, как .Любое предполагаемое представление о превосходной способности Америки реагировать на вспышку кризисного уровня внутри своих границ исчезло так же быстро, как и наши запасы масок N95, что означает, что мы все здесь сейчас вместе в этой сюрреалистической реальности — и хотя между нами должна быть социальная дистанция. физически мы больше не можем быть эмоционально отстраненными. Американский индивидуализм не исключает друг друга с сочувствием и сочувствием. Нам просто нужно напомнить себе, как на самом деле выглядит сострадание.

    Для меня сострадание выглядит как блеклая мысленная фотография выражения лица моей мамы, когда она поняла, что я боюсь.Спустя более 35 лет я все еще вижу то, что, как я знаю, было защитным инстинктом, это материнское желание успокоить, заверить и оградить меня от любой возможной боли, какой бы незначительной она ни была. Нереально ожидать, что люди будут относиться к незнакомцам так же, как родитель заботится о ребенке; однако доброте к другим можно научить. Я надеюсь, что через четыре, пять или шесть лет родителям придется поговорить со своими дошкольниками о том, почему им нужно делать иммунизацию от вируса COVID-19. Я знаю, что им придется объяснить, что несколькими годами ранее очень много людей заболели — и они, вероятно, не учтут тот факт, что так много людей умерло.Потому что так поступают родители. Но я также надеюсь, что они объяснят, что вакцинация сама по себе является актом сострадания; что это может не только спасти их жизни, но и потенциально многие другие жизни. И я могу только надеяться, что однажды, не так давно, может быть, другая мама скажет своей маленькой девочке, что ей никогда не нужно делать прививку той , потому что эта болезнь ушла навсегда.

    Эта статья появилась в июньском номере журнала 5280 за 2020 год.

    Линдси Б. Кинг, заместитель редактора

    Линдси Б. Кинг — заместитель редактора 5280.

    The Knick: Вы помните лунный цветок? Отзыв

    Однако на первый взгляд они тоже кажутся неуместными. К концу эпизода Текери превратился в кататоническую оболочку самого себя, раскачивающегося от потери любви, у Эбигейл и его кишечник ишемия от всего кокаина, который он проглотил. Робертсон был обвинен в убийстве своей любимой дочерью и, вероятно, мертв после того, как перепрыгнул много историй из тлеющей новой больницы Никербокера.Зачем показывать этих двух мужчин в лучшем виде только для того, чтобы позже показать их в худшем виде? Потому что Knick знает, как работает человек. Так потерпел крушение отчасти из-за внешних влияний, но также и из-за своих собственных ошибок. Он замечательный человек, способный спасти целую деревню никарагуанцев и двух очень счастливых и здоровых русских близнецов, которые теперь разлучены. Но он также и кокаиновый болван, который пожал плечами одному из своих коллег, практикующих евгенику. «Вы помните лунный цветок?» понимает конфликт в центре The Knick .Клятва гласит: «Не навреди», но человеческое состояние гласит: «Старайтесь не причинять никакого вреда, но вы, вероятно, все испортите на своем пути».

    Такери никогда не поправлялся от своей зависимости; он просто научился это скрывать. Единственное, что, казалось, сработало, — это словесное лекарство Абигейл, а теперь даже ее нет. «Вы помните лунный цветок?» видит Теккери в его самом подавленном состоянии. Вид его нетронутых белых туфель, раскачивающихся вокруг «Ника», обычно является признаком надежды, но теперь белые туфли просто рушатся под ним, когда он падает на улице от боли в животе.Его разум и тело ломаются. Услышав новости об ишемии кишечника, он демонстративно отказывается от операции в надежде, что сам сможет найти альтернативное лекарство. Это не потому, что он склонен к суициду, а потому, что это последняя проблема, которую ему нужно решить. Близнецы разлучены и в безопасности, а Эбигейл мертва и ушла, так что это единственное, что сейчас у него на тарелке — лучше доить ее изо всех сил.

    «Помнишь ли ты лунный цветок?» — отличный эпизод из «Ник» , потому что Клайв Оуэн в роли Джона Текери великолепен в нем. Knick обычно идет туда, куда идет доктор Джон Текери. Однако что интересно и освежает, так это то, что даже в эпизоде, где Тэк сталкивается с глубоко личными проблемами и в основном преуспевает, шоу не позволяет нам забыть, где он терпит неудачу. И это именно в его неубедительных попытках управлять доктором Галлингером.

    Галлингер превратился в монстра. И это потому, что его чудовищность обычно терпима, в том числе и Тек. Это печально, но ожидалось, что медицинская комиссия, услышавшая призыв Эдвардса к Галлинджеру и его маленьким экспериментам по стерилизации, станет громким одобрением для евгеники. Knick снова и снова демонстрирует, что миру Нью-Йорка 1900-х годов плевать на доктора Эдвардса или на честность. Но Текери должно насрать. Во втором сезоне может быть впечатляющий суперконтакт, и Текери войдет в комнаты и скажет Эдвардсу и Галлинджеру прекратить препираться, как если бы они спорили о том, что смотреть по телевизору, вместо того, чтобы бороться веками систематического расового и классического угнетения. Гэллинджер хладнокровно взбудоражил Эдвардса, назвал его «n-word», а затем поспешил домой, чтобы оттрахать сестру своей жены, находящейся в больнице, — это впечатляющая тройная угроза, и отчасти это доставляет вам буква «А», означающая апатию и умиротворение от таких мужчин, как Джон Текери.

    Большинство людей в Knick обычно хороши в своей основе, но в конце концов они все еще остаются людьми. Гарри и Клири продают презервативы по доброте души, но также для того, чтобы заработать. Нили хочет защитить город Нью-Йорк, но, вероятно, трагически неверно определяет, кто принес черную чуму. А есть те, кто кажутся злодеями: Гэллинджеры, Курганы и Элкинсы мира. Но все же … они просто люди. Гэллинджер — просто богатый парень с плохими идеями в мире, который постоянно говорит ему, что эти плохие идеи верны.Бэрроу просто хочет потрахаться. А Люси? Что ж, она действительно делает довольно злой карикатурный оборот, убивая своего отца, но не раньше, чем рассказывая ему обо всех своих незаконных грехах и приговаривая его к аду. Тем не менее, она молодая девушка, которая проходит ускоренный курс ошеломляющего лицемерия старших.

    Когда персонажи намереваются сделать из людей бугименов, они колеблются. Нили — довольно хороший сыщик, но к концу «Ты помнишь лунный цветок?» Совершенно очевидно, что она ошиблась, обвиняя своего отца в том, что он подвергает опасности жителей Нью-Йорка.